Принцип і конструктивні характеристики флуоресцентного мікроскопа
Флуоресцентний мікроскоп використовує точку з високою ефективністю світла, щоб випромінювати світло з певною довжиною хвилі (наприклад, ультрафіолетове світло 3650 або фіолетово-блакитне світло 4200) через систему кольорових фільтрів як світло збудження, а потім збуджує флуоресцентні речовини у зразку для випромінювання флуоресценції різними кольорами, а потім спостерігає їх через посилення лінзи об'єктива та окуляра. Таким чином, під сильним контрастним фоном, навіть якщо флуоресценція дуже слабка, його легко ідентифікувати та має високу чутливість. В основному він використовується для вивчення структури та функції клітини та хімічного складу. Основна структура флуоресцентного мікроскопа складається зі звичайного оптичного мікроскопа та деяких аксесуарів (таких як флуоресцентне джерело світла, фільтр збудження, дихроїчний розсіювач променя та блокуючий фільтр тощо). Флуоресцентне джерело світла — зазвичай використовується ртутна лампа надвисокого тиску (50-200 Вт), яка може випромінювати світло з різною довжиною хвилі, але кожна флуоресцентна речовина має довжину хвилі збудження, яка створює найсильнішу флуоресценцію, тому вона необхідно додати фільтри збудження (зазвичай фільтри збудження ультрафіолетового, фіолетового, синього та зеленого кольорів), щоб лише певна довжина хвилі світла збудження проходила до зразка, а все інше світло поглиналося. Після того, як кожна речовина опромінюється збуджуючим світлом, вона випромінює видиму флуоресценцію, довшу за довжину хвилі опромінення, за дуже короткий час. Флуоресценція має специфічність, яка зазвичай слабша, ніж світло збудження. Щоб спостерігати специфічну флуоресценцію, її необхідно заблокувати (або придушити) за лінзою об’єктива та використовувати разом.
Різниця між флуоресцентним мікроскопом і звичайним мікроскопом
1. Режим освітлення зазвичай епізодичний, тобто джерело світла проектується на зразок через об'єктив;
2. Джерелом світла є ультрафіолетове світло з короткою довжиною хвилі та вищою роздільною здатністю, ніж звичайний мікроскоп;
3. Є два спеціальні фільтри: один перед джерелом світла використовується для фільтрації видимого світла, а фільтр між окуляром і лінзою об’єктива використовується для фільтрації ультрафіолетового світла для захисту очей людей.
Флуоресцентний мікроскоп також є різновидом оптичного мікроскопа, основна відмінність якого полягає в тому, що їх довжини хвиль збудження різні. Це визначає різницю між флуоресцентним мікроскопом і звичайним оптичним мікроскопом за структурою та використанням.
Флуоресцентний мікроскоп є основним інструментом імунофлуоресцентної цитохімії. Він складається з джерела світла, системи фільтрів та оптичної системи. Він використовує світло з певною довжиною хвилі, щоб спонукати зразок випромінювати флуоресценцію, і збільшує його через систему лінз об’єктива та окуляра для спостереження за флуоресцентним зображенням зразка.
