Які спеціальні структурні компоненти флуоресцентного мікроскопа?
Блок кольорового фільтра є важливою частиною флуоресцентного мікроскопа, і його основні компоненти складаються з першого бар’єрного фільтра для збуджуючого світла, другого бар’єрного фільтра для випромінювання світла та дзеркала, що розділяє промінь. Моделі кольорових фільтрів і назви різних виробників часто не збігаються.
1. Збуджувальний світлофільтр і емісійний світлофільтр: на основі характеристик джерела світла та флуоресцентного пігменту зазвичай вибираються наступні три типи узгодження, щоб забезпечити збудження світла в певному діапазоні довжин хвиль і дозволити флуоресценції, збудженій зразком, проходити крізь окуляр і досягати його для отримання зображень.
УФ-збудження: фільтр збуджуючого світла може пропускати ультрафіолетове світло та блокувати видиме світло понад 400 нм. Відповідний емісійний світлофільтр пропускає синє світло, і світло в полі зору виглядає блакитним, наприклад, під час фарбування DAPI.
Збудження синього світла: фільтр збудження світла може пропускати синє світло та блокувати світло інших довжин хвиль. Відповідний емісійний світлофільтр пропускає зелене світло, наприклад маркери фарбування GFP.
Збудження зеленого світла: світлофільтр збудження пропускає зелене світло та блокує світло інших довжин хвиль. Відповідний емісійний світлофільтр зазвичай пропускає червоне світло, наприклад, фарбування родаміном.
2. Напівпрозорий і напіввідбивний кольоровий фільтр: його функція полягає в тому, щоб повністю блокувати збуджувальне світло від проходження та відбивати його; І випромінюють світло у відповідному діапазоні довжин хвиль. Його модель відповідає світлофільтру збудження та світлофільтру випромінювання.
(2) Об’єктив і окуляр
Можна застосовувати різні лінзи об’єктива, але найкраще вибирати лінзи з доданим масштабом і зменшенням хроматичної аберації, оскільки їхня власна флуоресценція надзвичайно низька, а їхні характеристики пропускання світла (діапазон довжин хвиль) придатні для флуоресценції. У зв'язку з тим, що яскравість флуоресценції зображення в полі мікроскопа прямо пропорційна квадрату світлосили лінзи об'єктива і обернено пропорційна його збільшенню, для поліпшення яскравості флуоресцентних зображень слід використовувати об'єктив з більшою світлосилою. Особливо для зразків із недостатньою флуоресценцією слід використовувати об’єктив із високою діафрагмою та високою пропускною здатністю світла, а також окуляр із найменшим можливим збільшенням.
(3) Інші оптичні пристрої
Відбиваючий шар дзеркала зазвичай покритий алюмінієм, оскільки алюміній поглинає менше ультрафіолетового та видимого світла в синьо-фіолетовій області, відбиваючи понад 90% (у той час як срібло має відбивну здатність лише 70%). Як правило, використовуються плоскі дзеркала. Фокусуюча лінза, спеціально розроблена та виготовлена для флуоресцентних мікроскопів, виготовлена з кварцового скла або іншого скла, яке пропускає ультрафіолетове світло. Пристрій падаючого світла, окрім функції джерела пропускання світла, більше підходить для прямого спостереження за непрозорими та напівпрозорими зразками, такими як товсті пластини, мембрани фільтрів, бактеріальні колонії, культури тканин та інші зразки. Останніми роками було розроблено багато нових типів флуоресцентних мікроскопів із використанням приладу з падаючим світлом, відомого як флуоресцентний мікроскоп з падаючим світлом.
(4) Джерело світла
Сьогодні як джерела світла зазвичай використовуються ртутні лампи високого тиску потужністю 50 або 100 Вт. Під час роботи між двома електродами виникає розряд, що призводить до випаровування ртуті та швидкого підвищення тиску всередині сфери (цей процес зазвичай займає близько 5-15 хвилин). Під час цього процесу випромінюються кванти світла, а довжина хвилі вивільненого світла достатня для збудження різних флуоресцентних речовин. Тому він широко використовується у флуоресцентних мікроскопах.
Термін служби ртутних ламп порівняно невеликий, зазвичай 200 годин. У відповідь на це обмеження терміну служби в останні роки широко використовувався новий тип люмінесцентного джерела світла X-Cite з наддовгим терміном служби лампи 2000 годин і гнучким використанням - без попереднього нагрівання, готовий до використання.
