Переваги та обмеження багатофотонних лазерних скануючих мікроскопів
Переваги наступні:
1. Збуджений червоним або інфрачервоним світлом розсіювання світла невелике (розсіювання малих частинок обернено пропорційне четвертому степеню довжини хвилі).
2. Немає потреби в отворах, здатних збирати більше розсіяних фотонів із поперечного-зрізу зображення.
3. Точкові дірки не можуть розрізнити розсіяні фотони, що випромінюються з розфокусованих або фокальних областей, а мультифотони мають краще співвідношення-до-шуму в глибоких зображеннях.
4. Ультрафіолетове або видиме світло, яке використовується для збудження одиночного фотона, легко поглинається та послаблюється зразком до того, як промінь досягне фокальної площини, що ускладнює збудження глибоких шарів.
5. З точки зору біологічного мікроскопічного спостереження, перш за все слід враховувати, щоб не пошкодити активний стан самого організму та підтримувати циркуляцію води, концентрацію іонів, кисню та поживних речовин. У сфері спостереження світла як теплова, так і фотонна енергія повинні залишатися в межах дози опромінення та світлової енергії, які не пошкоджують клітини.
6. Багатофотонна мікроскопія також має багато переваг. З точки зору тривимірної роздільної здатності, проникнення в глибину, ефективності розсіювання, фонового освітлення, співвідношення сигнал-до-шуму, керування тощо лазерні мікроскопи мають неперевершені або кращі характеристики, яких не мали попередні лазерні мікроскопи.
Багатофотонний конфокальний лазерний скануючий мікроскоп поширено на різні галузі досліджень і застосування. Він може виконувати три{0}}вимірне не-деструктивне спостереження за зразками в їхньому природному стані та покращувати роздільну здатність і співвідношення-сигнал-шум системи. Використовуючи зміни у властивостях матеріалу після багатофотонного збудження, три-зберігання даних про висоту та також можна досягти тривимірного мікровиробництва в будь-якому напрямку, що має високу прикладну цінність. Можна вважати, що з подальшим розвитком механічних, матеріальних і лазерних технологій, пов’язаних із багатофотонною конфокальною мікроскопією, багатофотонна конфокальна лазерна скануюча мікроскопія матиме більший розвиток і широке застосування
Недоліки такі:
1. Тільки для флуоресцентної візуалізації.
2. Якщо зразок містить хромофори, які можуть поглинати світло збудження, наприклад пігменти, зразок може бути підданий термічному пошкодженню.
3. Роздільна здатність трохи знижена, хоча її можна покращити, одночасно використовуючи конфокальні маленькі отвори, буде втрата сигналу.
4. Через обмеження дорогих надшвидких лазерів вартість багатофотонних скануючих мікроскопів відносно висока.
