Використання стереофлуоресцентного мікроскопа та запобіжні заходи
Інструкції:
(1) Розмістіть аркуш матеріалів на сцені.
(2) Увімкніть стабілізатор напруги люмінесцентного мікроскопа. Потім натисніть пускову групу, щоб запалити УФ-лампу, і не вимикайте її протягом 15 хвилин, і не запускайте знову протягом 3 хвилин після її вимкнення.
(3) Увімкніть фільтр збудження в положення v, фільтр розділення кольорів у положення v і виберіть блокуючий фільтр 495 або 475 нм.
(4) Виберіть мікроскоп з флуоресцентним об’єктивом uvFL40, uvFL100 для мікроскопічного дослідження.
(5) Додайте нефлуоресцентну олію на предметне скло, спочатку використовуйте 40-кратний, а потім 100-кратний фокусуючий мікроскоп для перевірки. З'являється флуоресценція.
(7) Оскільки флуоресценція флуоресцентних речовин поступово слабшає з часом, коли вони опромінюються ультрафіолетовим світлом, під час мікроскопічного дослідження необхідно часто змінювати поле зору.
(8) Мікроскопи з низьким збільшенням uvFL10 або uvFL20 також можна використовувати для перевірки матеріалів (при використанні малосилових лінз флуоресцентне масло не додається).
Метод запису флуоресцентного зображення:
Флуоресцентне зображення, яке бачить флуоресцентний мікроскоп, має як морфологічні характеристики, так і колір і яскравість флуоресценції. Оцінюючи результати, ці два параметри необхідно об’єднати для повного оцінювання. Результати фіксують за суб'єктивними показниками, тобто візуальним спостереженням працівників. Як загальне якісне спостереження, в основному надійне. З розвитком технологій і науки об’єктивні індикатори використовуються для запису результатів судження різною мірою, такі як клітинні спектрофотометри, аналізатори зображень та інші прилади. Однак результати, зафіксовані цими інструментами, також повинні поєднуватися з суб’єктивними судженнями.
Флуоресцентна мікроскопічна фотографія дуже необхідна для запису флуоресцентних зображень. Оскільки флуоресценцію легко згаснути та послабити, необхідно записувати результати в режимі реального часу. Метод в основному такий самий, як і звичайна мікрофотографія. Просто потрібно використовувати високошвидкісну світлочутливу плівку, таку як ASA200 або вище або 24. вище. Оскільки ультрафіолетове світло сильно впливає на гасіння флуоресценції, наприклад маркери FITC, яскравість флуоресценції зменшиться на 50 відсотків під час опромінення ультрафіолетовим світлом протягом 30 секунд. Таким чином, якщо швидкість експозиції надто низька, флуоресцентне зображення не вийде. Загальні дослідницькі флуоресцентні мікроскопи мають напівавтоматичні або повністю автоматичні системи мікрофотографії.
Запобіжні заходи:
(1) Працюйте суворо відповідно до вимог заводських інструкцій флуоресцентного мікроскопа та не змінюйте програму за бажанням.
(2) Перевірку слід проводити в темній кімнаті. Увійшовши в темну кімнату, підключіть джерело живлення та запаліть ртутну лампу надвисокого тиску на 5-15 хвилин. Коли яскраве світло від джерела світла стає стабільним, очі повністю адаптуються до темної кімнати, а потім починають спостерігати за зразком.
(3) Щоб запобігти пошкодженню очей ультрафіолетовими променями, під час регулювання джерела світла слід одягати захисні окуляри.
(4) Час перевірки бажано становити 1-2 годин кожного разу. Якщо він перевищує 90 хвилин, інтенсивність світла ртутної лампи надвисокого тиску поступово зменшуватиметься, а флуоресценція слабшатиме; після опромінення зразка ультрафіолетовими променями протягом 3-5 хвилин флуоресценція також значно послабиться; тому він не повинен перевищувати щонайбільше 2-2 годин. 3 год.
(5) Термін служби джерела світла флуоресцентного мікроскопа обмежений, і зразки слід перевіряти колективно, щоб заощадити час і захистити джерело світла. Коли погода спекотна, слід додати вентилятори для розсіювання тепла, а нові лампочки слід реєструвати з початку їх використання. Якщо ви хочете використовувати її знову після того, як лампа погасла, ви повинні зачекати, поки лампочка достатньо охолоне, перш ніж запалити її. Уникайте запалювання джерела світла кілька разів на день.
(6) Спостерігайте за зразком одразу після фарбування, оскільки з часом флуоресценція поступово слабшає. Якщо зразок зберігається в поліетиленовому поліетиленовому пакеті при 4 градусах, час ослаблення флуоресценції може бути відстрочений і можна запобігти випаровуванню кріпильного агента.
(7) Оцінювальний стандарт яскравості флуоресценції: зазвичай він поділяється на чотири рівні, тобто «один» — флуоресценція відсутня або слабка. «плюс» — можна побачити лише чітко видиму флуоресценцію. «плюс плюс» — видимий і яскравий
