Принципи, характеристики та застосування флуоресцентної мікроскопії
Принцип і структурні характеристики флуоресцентного мікроскопа: у флуоресцентному мікроскопі використовується точкове джерело світла з високою світловою ефективністю, яке випромінює певну довжину хвилі світла (наприклад, ультрафіолетове світло 3650 дюймів або ультрафіолетове синє світло 4200 дюймів) через систему фільтрації кольорів як світло збудження. Флуоресцентна речовина у зразку збуджується, щоб випромінювати різні кольори флуоресценції, а потім спостерігати за допомогою збільшення об’єктива та окуляра. Таким чином, навіть із слабкою флуоресценцією, він легко розпізнається та є високочутливим на сильному контрастному фоні, головним чином використовується для вивчення клітинної структури та функції, а також хімічного складу. Основна структура флуоресцентного мікроскопа складається зі звичайного оптичного мікроскопа та деяких аксесуарів (таких як флуоресцентне джерело світла, фільтр збудження, біхроматичний роздільник пучка, блокуючий фільтр тощо). Люмінесцентні джерела світла - зазвичай використовують ртутні лампи надвисокого тиску (50-200W), які можуть випромінювати світло різної довжини хвилі. Однак кожна флуоресцентна речовина має довжину хвилі збуджуючого світла, яка створює найсильнішу флуоресценцію, тому потрібно додати збуджуючі фільтри (зазвичай ультрафіолетові, фіолетові, сині та зелені збуджуючі фільтри), щоб дозволити лише певній довжині хвилі збуджувального світла проходити та освітлювати зразок, поглинаючи все інше світло. Після опромінення збудженим світлом кожна речовина випромінює видиму флуоресценцію з більшою довжиною хвилі, ніж опромінення, за дуже короткий проміжок часу. Флуоресценція має специфічність і, як правило, слабша, ніж світло збудження. Щоб спостерігати специфічну флуоресценцію, за лінзою об’єктива потрібно додати блокуючий (або пригнічуючий) фільтр.
Він виконує дві функції: по-перше, він поглинає та блокує збуджувальне світло від потрапляння в окуляр, щоб уникнути порушення флуоресценції та пошкодження очей; по-друге, він вибирає та пропускає певну флуоресценцію, відображаючи певний колір флуоресценції. Обидва типи фільтрів повинні бути обрані для спільного використання.
