Принципи та особливості будови флуоресцентної мікроскопії
Флуоресцентний мікроскоп — це використання високої світлової ефективності точкового джерела світла за допомогою системи кольорової фільтрації для випромінювання певної довжини хвилі світла (наприклад, ультрафіолетового 3650 або фіолетово-синього 4200) як збуджуючого світла, збудження флуоресцентного матеріалу всередині зразок випромінює різні кольори флуоресценції, а потім збільшується через об’єктив і окуляри для спостереження. Таким чином, на фоні сильного контрасту, навіть якщо флуоресценція дуже слабка, її легко ідентифікувати, висока чутливість, в основному використовується для вивчення структури клітини, її функції та хімічного складу. Основна структура флуоресцентного мікроскопа складається зі звичайного оптичного мікроскопа та деяких аксесуарів (таких як джерело флуоресцентного світла, фільтри збудження, двоколірний розділювач променів і блокувальні фільтри тощо). Флуоресцентне джерело світла – зазвичай використовується ртутна лампа надвисокого тиску (50-200 Вт), яка може випромінювати світло з різною довжиною хвилі, але кожен флуоресцентний матеріал має найсильнішу довжину хвилі збудження флуоресценції, тому потрібно додати фільтри збудження (зазвичай ультрафіолетовий, фіолетовий, синій і зелений фільтр збудження), так що лише певна довжина хвилі збуджуючого світла через опромінення зразків, тоді як інше світло поглинається. Тому необхідно додати фільтр збудження (зазвичай фільтри збудження ультрафіолетового, фіолетового, синього та зеленого кольорів), щоб зразок проходив лише світло певної довжини хвилі збудження, тоді як інше світло поглиналося. Коли кожна речовина опромінюється збуджуючим світлом, вона випромінює видиму флуоресценцію з більшою довжиною хвилі, ніж опромінене світло, протягом дуже короткого часу. Флуоресценція має специфічність, як правило, слабкішу, ніж світло збудження, щоб мати можливість спостерігати специфічну флуоресценцію в лінзі об’єктива за потребою додати блокуючий (або пригнічуючий) фільтр.
Його роль подвійна:
Один полягає в тому, щоб поглинати та блокувати світло збудження в окулярі, щоб не порушити флуоресценцію та не пошкодити око.
Другий – вибрати та пропустити певну флуоресценцію, показуючи певний флуоресцентний колір. Обидва типи фільтрів необхідно вибрати та використовувати разом.
