Підготовка та спостереження біологічних зразків для електронної мікроскопії
Роздільна здатність мікроскопа залежить від довжини хвилі використовуваного світла. Електронний мікроскоп почав з’являтися в 1933 році завдяки використанню набагато коротшої довжини хвилі електронного променя, ніж видиме світло, як джерело світла, так що роздільна здатність його може досягти, ніж оптичний мікроскоп значно вдосконалений. Різне джерело світла також визначає ряд відмінностей між електронним мікроскопом і оптичним мікроскопом.
Відповідно до відмінностей у принципі візуалізації електронного променя та ролі зразка на різних способах, сучасний електронний мікроскоп був розроблений для створення кількох типів, на даний момент * зазвичай використовуються трансмісійний електронний мікроскоп і скануючий електронний мікроскоп мікроскопа, перший може бути в діапазоні 1,000-1,000,000 разів більше загального збільшення діапазону змін, останній може бути в загальному збільшенні { {4}},000 разів більше загального збільшення змін між. Цей експеримент зосереджений на підготовці зразків для двох типів мікроскопів, трансмісійного електронного мікроскопа та скануючого електронного мікроскопа.
Матеріали
1. Штам кишкової палички (Escherichia coli, Escherichia coli) кос.
2. Розчини або реактиви Амілацетат, концентрована сірчана кислота, безводний етанол, стерильна вода, 2% натрію фосфорновольфрамової кислоти (pH 6.5-8.0) водний розчин, 0.3% розчин полівінілформальдегіду (розчинений у трихлорметані), цитохром с, ацетат амонію, плазміда pBR322.
3. Інструменти та інші приналежності Звичайний оптичний мікроскоп, мідна сітка, порцелянова воронка, мензурка, плоске блюдо, стерильна бюретка, стерильний пінцет, ланцет, предметні скла, ** лічильна пластина, вакуумний пристрій для нанесення покриттів, сушарка для критичної точки тощо.
Етапи операції
(I) Підготовка зразка та спостереження за допомогою трансмісійної електронної мікроскопії
1. Обробка металевої сітки
Зразки для оптичної мікроскопії поміщають на предметні скла для спостереження. Однак у просвічуючій електронній мікроскопії, оскільки електрони не можуть проникнути через скляний лист, лише сітчастий матеріал можна використовувати як носій, який зазвичай називають несучою сіткою. Несучу сітку можна розділити на багато різних специфікацій через різні матеріали та форми, серед яких * зазвичай використовується 200-400 сітка (кількість отворів) мідна сітка. Мідну сітку слід обробити перед використанням, щоб видалити з неї бруд і підтримувати її в чистоті, інакше це вплине на якість підтримуючої плівки та чіткість фотографій зразків. Мідна сітка, використана в цьому експерименті, становить 400 меш, яку можна обробити таким чином: спочатку відбілити її амілацетатом протягом кількох годин, потім кілька разів промити дистильованою водою, а потім відбілити в безводному етанолі протягом декількох годин. зневоднення. Якщо мідна сітка за допомогою вищевказаного методу все ще не чиста, її можна використовувати для розведення концентрованої сірчаної кислоти (1:1), зануреної на 1 ~ 2 хвилини, або в 1% розчин NaOH, кип’ятіння протягом кількох хвилин, кілька разів промивання дистильованою водою , поміщений у дегідратацію безводного етанолу, який буде використаний.
2. Підготовка несучої плівки
Під час спостереження за зразком несучу мережу також слід покрити шаром неструктурованої рівномірної плівки, інакше невеликі зразки будуть витікати з отворів у несучій мережі. Цей шар плівки зазвичай називають опорною плівкою або несучою плівкою. Опорна плівка повинна бути прозорою для електронів, а її товщина, як правило, повинна бути менше 20 нм; під впливом електронного променя плівка також повинна мати певний ступінь механічної міцності, зберігати стабільність структури та мати хорошу теплопровідність; крім того, опорна мережа не повинна мати видимої структури під електронним мікроскопом, не мати хімічної реакції зі зразком, що переноситься, і не заважати спостереженню за зразком, а її товщина, як правило, становить близько 15 нм. Підтримуюча плівка може бути виготовлена з пластикової плівки (наприклад, бавовняної плівки, поліетиленформальдегідної плівки тощо), вуглецевої плівки або металевої плівки (наприклад, берилію тощо). У звичайних робочих умовах вимогам можна задовольнити пластикову плівку, тоді як підготовка поліетиленової плівки у вогневій бавовняній клейкій плівці відносно проста, але міцність не така сильна, як поліетиленформальдегідна плівка.
