Підготовка та спостереження біологічних зразків для електронних мікроскопів
Роздільна здатність мікроскопа залежить від довжини хвилі використовуваного світла. Електронний мікроскоп, який з’явився в 1933 році, досяг значно вищої роздільної здатності, ніж оптичний мікроскоп, завдяки використанню в якості джерел світла електронних променів з довжиною хвилі, набагато меншою за видиме світло. Різні джерела світла також визначають низку відмінностей між електронними мікроскопами та оптичними мікроскопами.
На основі відмінностей у принципах візуалізації електронним променем і способах, якими вони впливають на зразки, сучасні електронні мікроскопи розвинулися в багато типів. В даний час найбільш поширеними є трансмісійні електронні мікроскопи та скануючі електронні мікроскопи. Перший має загальне збільшення, яке може варіюватися в межах 1000-10000000 разів, а другий має загальне збільшення, яке може змінюватися в межах 20-300000 разів. Цей експеримент в основному представляє підготовку двох типів мікроскопічних зразків, просвічуючої електронної мікроскопії та скануючої електронної мікроскопії.
2, Обладнання
1. Штам Escherichia coli схильний.
2. Розчин або реактив: пентилацетат, кислота сірчана концентрована, етанол безводний, вода стерильна, 2% водний розчин фосфорновольфрамату натрію (рН 6,5-8,0), 0,3% розчин полівінілформальдегіду (розчинений у хлороформі), цитохром с, амоній ацетат, плазміда pBR322.
3. Інструменти та інші інструменти включають звичайні оптичні мікроскопи, мідні сітки, порцелянові воронки, склянки, чашки Петрі, стерильні крапельниці, стерильні пінцети, шпильки, предметні скла, лічильні пластини, машини для вакуумного нанесення покриттів, сушарки для критичних точок тощо.
3, кроки операції
(1) Підготовка та спостереження за зразками для трансмісійної електронної мікроскопії
1. Обробка металевої сітки
Зразок оптичного мікроскопа поміщають на предметне скло для спостереження. Однак у трансмісійному дзеркалі, оскільки електрони не можуть проникнути через скляний лист, сітчастий матеріал може використовуватися лише як носій, який зазвичай називають несучою сіткою. Несучу сітку можна розділити на різні специфікації через різні матеріали та форми, серед яких зазвичай використовується мідна сітка з 200-400 меш (кількістю отворів). Мідну сітку слід обробити перед використанням, щоб видалити будь-який бруд і підтримувати її чистою, інакше це вплине на якість підтримуючої плівки та чіткість фотографій зразків. Мідну сітку розміром 400 меш, використану в цьому експерименті, можна обробити наступним методом: спочатку замочіть і поплавьте пентилацетатом на кілька годин, потім кілька разів промийте дистильованою водою і, нарешті, занурте та поплавьте мідну сітку в безводний етанол для зневоднення. Якщо мідна сітка все ще не чиста після вищевказаних методів, її можна замочити в розведеній концентрованій сірчаній кислоті (1:1) на 1-2 хвилини або прокип’ятити в 1% розчині NaOH протягом декількох хвилин, кілька разів промити дистильованою водою, а потім зневоднити в безводному етанолі для подальшого використання.
