Чим флуоресцентна мікроскопія відрізняється від конфокальної лазерної мікроскопії
Флуоресцентний мікроскоп
1. Флуоресцентний мікроскоп використовує ультрафіолетове світло як джерело світла для освітлення досліджуваного об’єкта, щоб він випромінював флуоресценцію, а потім спостерігає форму та розташування об’єкта під мікроскопом. Флуоресцентна мікроскопія використовується для вивчення поглинання та транспортування речовин у клітинах, а також розподілу та позиціонування хімічних речовин. Деякі речовини в клітинах, наприклад хлорофіл, можуть флуоресціювати після опромінення ультрафіолетовими променями; деякі речовини самі по собі не можуть флуоресціювати, але якщо їх пофарбувати флуоресцентними барвниками або флуоресцентними антитілами, вони можуть флуоресціювати після опромінення ультрафіолетовими променями. Флуоресцентна мікроскопія є одним із інструментів для якісного та кількісного дослідження таких речовин.
2. Принцип роботи флуоресцентного мікроскопа:
(A) Джерело світла: джерело світла випромінює світло різних довжин хвиль (від ультрафіолетового до інфрачервоного).
(B) Джерело світла фільтра збудження: пропускає світло певної довжини хвилі, що може спричинити флуоресценцію зразка, блокуючи світло, марне для стимулювання флуоресценції.
(C) Флуоресцентні зразки: зазвичай пофарбовані флуоресцентними пігментами.
(D) Блокуючий фільтр: блокує світло збудження, яке не поглинається зразком, і вибірково пропускає флуоресценцію. Деякі довжини хвиль у флуоресценції також вибірково передаються. Мікроскоп, який використовує ультрафіолетове світло як джерело світла, щоб викликати флуоресценцію освітленого об’єкта. Електронний мікроскоп був вперше зібраний у 1931 році в Берліні, Німеччина, Норром і Галловською. У цьому мікроскопі замість світлового променя використовується високошвидкісний електронний промінь. Оскільки довжина хвилі потоку електронів набагато коротша за хвилю світла, збільшення електронного мікроскопа може досягати 800,000 разів, а мінімальна межа роздільної здатності становить 0,2 нанометра. Скануючий електронний мікроскоп, який почали використовувати в 1963 році, дозволяє людям бачити крихітні структури на поверхні предметів.
3. Сфера застосування: Використовується для збільшення зображень невеликих об'єктів. Зазвичай використовується для спостережень біології, медицини, мікроскопічних частинок тощо.
конфокальний мікроскоп
1. Конфокальний мікроскоп додає до оптичного шляху відбитого світла напіввідбивну напівлінзу, яка заломлює відбите світло, яке пройшло через лінзу, в інших напрямках. У фокусі є перегородка з точковим отвором, а отвір розташоване. У фокальній точці за перегородкою знаходиться фотопомножувач. Можна уявити, що відбите світло до та після фокусу світла виявлення проходить через цю конфокальну систему та не може бути сфокусовано на маленькому отворі, і буде заблоковано перегородкою. Отже, фотометр вимірює інтенсивність відбитого світла у фокусі.
2. Принцип: традиційні оптичні мікроскопи використовують польові джерела світла, і зображення кожної точки на зразку буде заважати дифракції або розсіяному світлу від сусідніх точок; лазерні скануючі конфокальні мікроскопи використовують лазерні промені для формування точкових джерел світла через освітлювальні отвори для освітлення внутрішньої частини зразка. Кожна точка фокальної площини сканується, і освітлена точка на зразку відображається на точці детектування, яка точка за точкою або лінія за лінією отримується фотопомножувачем (ФЕУ) або пристроєм холодного сполучення (cCCD) позаду детектора. пінхол, і швидко на екрані монітора комп’ютера утворюється флуоресцентне зображення. Освітлювальний отвір і отвір виявлення спряжені відносно фокальної площини лінзи об’єктива. Точки на фокальній площині одночасно фокусуються на точці освітлення та точці випромінювання. Точки за межами фокальної площини не будуть зображені на точці виявлення. Отримані конфокальні зображення є оптичними поперечними перерізами зразків, що дозволяє усунути недоліки розмитих зображень у звичайних мікроскопах.
3. Сфери застосування: медицина, наукові дослідження тварин і рослин, біохімія, бактеріологія, клітинна біологія, тканинна ембріологія, харчові науки, генетика, фармакологія, фізіологія, оптика, патологія, ботаніка, неврологія, морська біологія та матеріалознавство, електроніка , механіка, нафтова геологія, мінералогія.
