За принципом проходження світла флуоресцентні мікроскопи можна розділити на два типи:
1. Просвічуючий флуоресцентний мікроскоп
У старих флуоресцентних мікроскопах джерело збуджуючого світла проходить через матеріал зразка через конденсор для збудження флуоресценції. Перевагою є те, що флуоресценція є сильною при малому збільшенні, але недоліком є те, що флуоресценція слабшає зі збільшенням збільшення. Тому він придатний лише для спостереження за більшими матеріалами зразків.
2. Епіфлуоресцентна мікроскопія
Збуджувальне світло падає вниз від лінзи об'єктива на поверхню зразка, тобто одна і та ж лінза об'єктива використовується як конденсор освітлення та лінза об'єктива для збору флуоресценції.
До оптичного шляху, який знаходиться під кутом 45° до оптичної осі, необхідно додати дихроїчний світлорозділювач (дихроїчне дзеркало). Світло збудження відбивається в лінзу об'єктива і концентрується на зразку. Флуоресценція, створювана зразком, відбивається поверхнею лінзи об’єктива та кришкою. Світло збудження, відбите на поверхні предметного скла, одночасно потрапляє в лінзу об’єктива і повертається до дихроїчного розсіювача променя, щоб розділити світло збудження та флуоресценцію. Залишкове світло збудження потім поглинається блокуючим фільтром. Якщо ви використовуєте різні комбіновані вставки фільтра збудження/двоколірного світлорозділювача/блокуючого фільтра, ви можете задовольнити потреби в різних продуктах реакції флуоресценції.
Перевага цього виду флуоресцентного мікроскопа в тому, що поле зору рівномірно освітлене, зображення чітке, і чим більше збільшення, тим сильніше флуоресценція.
Які основні категорії оптичних мікроскопів?
1. Звичайний оптичний мікроскоп
Звичайні оптичні мікроскопи в основному складаються з таких частин: система освітлення, яка включає джерело світла і конденсор; система оптичного збільшення, яка складається з лінзи об’єктива та окуляра. Це найважливіша частина мікроскопа, призначена для того, щоб уникнути надмірної сферичної та хроматичної аберацій, як окуляр, так і лінза об’єктива складаються зі складних груп лінз.
2. Лазерний конфокальний скануючий мікроскоп
Лазерний конфокальний скануючий мікроскоп виглядає дуже висококласним і складним. Насправді він просто використовує лазер як скануюче джерело світла для швидкого сканування та зображення об’єктів точка за точкою, лінія за лінією та поверхня за поверхнею.
Оскільки лазерний промінь має меншу довжину хвилі, сам промінь дуже тонкий, що визначає високу роздільну здатність конфокального лазерного скануючого мікроскопа, яка приблизно в три рази перевищує роздільну здатність звичайного оптичного мікроскопа. Цей тип мікроскопа використовується для спостереження за морфологією клітин і кількісного аналізу внутрішньоклітинних біохімічних компонентів і вимірювання морфології клітин.
3. Темнопольний мікроскоп
У центрі конденсора темнопольного мікроскопа є світлова пластина, яка перешкоджає прямому попаданню світла освітлення в об'єктив. Лише світло, відбите та дифраговане зразком, може потрапити в лінзу об’єктива. Тому фон поля зору чорний, а краї об’єктів світлі.
