Детально опишіть етапи вибору та методи флуоресцентних зондів для конфокальної мікроскопії
В експериментах із конфокальними мікроскопами деякі експериментальні індикатори можна виявити за допомогою автофлуоресценції самого зразка або екзогенних речовин, але більшість речовин, що підлягають тестуванню, не мають вимірюваної флуоресценції та потребують мітки флуоресцентними зондами. Він має вимірний флуоресцентний сигнал. Отже, як вибрати флуоресцентні зонди для конфокальної мікроскопії?
1. Визначити показники, що перевіряються відповідно до мети досліду
Після визначення індексу виявлення також визначається діапазон вибору флуоресцентних зондів. Видно, що вибір того, який флуоресцентний зонд використовувати в експерименті, визначається метою експерименту. Наприклад, якщо метою експерименту є вивчення змін іонів кальцію в кардіоміоцитах при фібриляції передсердь, можна визначити, що досліджуваною речовиною є іони кальцію в кардіоміоцитах, а діапазон вибору флуоресцентних зондів обмежений зонди іонів кальцію, які можуть мітити живі клітини. Голка.
2. Визначте діапазон доступних флуоресцентних зондів
Для нових експериментальних речовин або індикаторів, якщо мета експерименту не полягає в дослідженні нових флуоресцентних зондів, ви можете застосувати зрілі зонди та методи маркування. Тип або діапазон флуоресцентних зондів, які можуть позначати речовину, що перевіряється, можна визначити шляхом пошуку авторитетної літератури або каталогів продукції відомих компаній-виробників реактивів у країні та за кордоном.
3. Дослідіть, чи відповідають характеристики флуоресцентного зонда вимогам для підготовки флуоресцентних зразків
Характеристики флуоресцентних зондів безпосередньо впливають на маркування зразків і результати експерименту. Тому перед тим, як вибрати флуоресцентні зонди та позначити зразки в експерименті, необхідно повністю зрозуміти їхні флуоресцентні характеристики. Характеристики флуоресцентних зондів, що підлягають дослідженню, включають:
1. Реакційні характеристики світлових зондів і зразків
2. Чутливість та інтенсивність флуоресценції флуоресцентних зондів
3. Спектральні властивості зразків, мічених флуоресцентними зондами
4. Стабільність флуоресценції
5. Взаємодія множинної флуоресценції в зразку
