Чому збільшення масляної лінзи більше, ніж збільшення звичайної лінзи?
Причини, чому бактерії необхідно фіксувати перед фарбуванням у мікробіологічних експериментах:
1: Вбиває клітини, легко забарвлюється барвником.
2: Змусьте бактерії прилипнути до предметного скла, і їх нелегко змити водою.
Під час закріплення слід повільно висихати. Якщо дуже хочеться прискорити, можна кілька разів просушити його на відстані над полум'ям спиртівки. Не дозволяйте предметному склу нагріватися, інакше це може знищити форму життя бактерій.
Фарбування за Грамом і мікроскопічне спостереження бактерій
1. Експериментальний принцип
Принцип фарбування за Грамом: бактерії по-різному реагують на фарбування за Грамом через склад і структуру їх клітинних стінок. Клітинна стінка грампозитивних бактерій являє собою переважно мережевий вузол, утворений пептидогліканом. При обробці етанолом розмір пор сітчастої структури стає меншим через дегідратацію, а проникність зменшується, так що комплекс кристалічний фіолетовий йод. Речовина важко елюювати та утримувати в клітині, а синьо- фіолетовий колір основного фарбувального агента все ще зберігається після знебарвлення та контрастного фарбування. Пептидоглікановий шар клітинної стінки грамнегативних бактерій тонкий, а вміст ліпідів високий, тому під час обробки знебарвленням ліпід розчиняється етанолом (або ацетоном), і проникність клітинної стінки збільшується, тому що комплекс кристалічний фіолет-йод легше елююється, і після контрфарбування контрфарбою клітини забарвлюються червоним кольором контрфарби. Принцип формування зображення мікроскопа: сучасні звичайні оптичні мікроскопи використовують дві системи лінз окуляра та лінзи об’єктива для збільшення зображення, тому їх часто називають складними мікроскопами. В оптичній системі мікроскопа найбільш критичною є продуктивність лінзи об’єктива, а найбільшим є збільшення масляної лінзи, що є найважливішим для мікробіологічних досліджень. Основна мета додавання імерсійної олії між предметним склом і лінзою полягає в тому, щоб збільшити яскравість освітлення і збільшити роздільну здатність мікроскопа. Масло використовується замість повітря як світлопроникне середовище, щоб зменшити заломлення або повне відбиття світла та зробити спостережуване зображення чіткішим.
2. Експериментальне обладнання
1. Колонії:
Escherichia coli 24h живильний агар скошеної культури,
Staphylococcus aureus близько 24 годин на поживному агарі, Bacillus subtilis 12-18h на поживному агарі.
2. Розчини або реагенти:
Вода дистильована, розчин йоду, розчин кристалічного фіолетового, 95% спирт, розчин сафраніну, кедрова олія. 3. Інструмент:
Мікроскоп, предметне скло, посівна петля, спиртівка, пінцет, серветка для лінз.
3. Експериментальні етапи
a:
1. Мазок
Вийміть предметне скло, запаліть предметне скло, спаліть спирт на предметному склі та стерилізуйте його, помістіть невелику краплю дистильованої води в середину, використовуйте петлю для посіву, щоб обережно вибрати невелику кількість бактерій із нахиленого середовища тесту. Під час усього процесу горловина пробірки має бути над спиртовою лампою, а швидкість має бути високою, щоб запобігти забрудненню культурального середовища. Потім круговими рухами розмажте маленькі краплі води на предметному склі, зупиніться, коли краплі води помутніють, і зачекайте, поки вони висохнуть і зафіксуються.
2. Первинне фарбування
Нанесіть кристалічний фіолетовий (доречно лише покрити бактеріальну плівку) на колонію, пофарбуйте протягом 1-2 хвилин, злийте розчин для фарбування та промийте дрібною водою з верхньої частини предметного скла, доки елюат не стане безбарвним, і помістіть пляму на предметне скло. Струсіть воду на скибочки.
3. Морилка
Додайте по краплях розчин йоду, щоб змити залишки води, накрийте кришкою приблизно на 1 хв і промийте водою.
4. Знебарвлення
Струсіть воду на предметне скло, нахиліть предметне скло та додайте 95-відсотковий спирт, щоб знебарвити його під білим фоном, доки спирт, що витікає, не стане синім, негайно змийте спирт водою та помістіть предметне скло Струсіть від води на скибочки.
5. Контрафарбування
Профарбуйте розчином сафраніну приблизно 1-2 хвилин, промийте водою, а потім промокніть абсорбуючим папером
6. Мікроскопічне дослідження:
Знайдіть бактеріальну колонію, яку потрібно спостерігати під лінзою малого збільшення (продовжуйте рухати предметне скло, якщо відчуєте червону тінь, негайно зупиніться, відрегулюйте збільшення, якщо це не колонія, продовжуйте знаходити), підніміть оправу лінзи, а потім перейдіть до масляного дзеркала. Додайте краплю кедрової олії в область зразка й обережно опустіть тубус лінзи за допомогою грубого регулятора так, щоб масляна лінза була занурена в олію й майже торкалася зразка. Підніміть конденсор у найвище положення та повністю відкрийте діафрагму, використовуйте грубий регулятор, щоб повільно підняти оправу об’єктива, доки зображення об’єкта не з’явиться в полі зору, і використовуйте точний регулятор, щоб зробити його чітким і сфокусованим.
