Які характеристики зразків потрібні для світлової мікроскопії?
У процесі підготовки зразка в оптичному мікроскопі товщина зрізу зразка становить 2-25 мкм; товщина зрізу електронного мікроскопа знаходиться в межах 50-100 нм (за винятком високовольтного електронного мікроскопа, товщина зразка якого може досягати 1 мкм), тому метод зрізу не завжди однаковий.
З точки зору носія, носієм секції оптичного мікроскопа є предметне скло, а носієм секції електронного мікроскопа є сітка.
З точки зору фіксації зрізи оптичного мікроскопа фіксують складним фіксатором, а зрізи електронного мікроскопа фіксують повторно одним фіксатором.
З точки зору фарбування, фарбування оптичних зразків відносно просте. Відповідно до різних зразків для спостереження та типів оптичних мікроскопів, зазвичай достатньо пофарбувати деякими фіксованими барвниками. Існує багато і складних методів повторного фарбування зразків електронного мікроскопа, таких як негативне фарбування, фарбування сріблом тощо.
Що стосується заливки, то для зрізів оптичного мікроскопа в якості заливки використовують парафін, колодій, желатин і ін.; епоксидна смола, полістирольна смола, ізобутиленова смола та водорозчинна смола використовуються як заливні агенти для секцій електронного мікроскопа.
Щоб забезпечити рівномірне та повне освітлення поля зору мікроскопа, під час першого встановлення та налагодження мікроскопа необхідно налаштувати оптичну систему освітлення. Це важливий засіб і найосновніший спосіб правильного використання мікроскопа та отримання правильних і надійних результатів. вимоги. Крім того, правильне оволодіння налаштуванням системи оптичного шляху освітлення є необхідним кроком після заміни лампи джерела світла під час використання мікроскопа, а також необхідним засобом для перевірки продуктивності мікроскопа час від часу протягом щоденного огляду. використовувати. Налаштування системи оптичного шляху освітлення мікроскопа в основному включає наступні чотири пункти: 1. Попереднє налаштування камери джерела світла за межами мікроскопа ① Спочатку відкрийте корпус камери лампи, натисніть пружинний затискач, щоб вставити галогенну лампу в мікроскоп. гнізда та уникайте прямого контакту з лампою пальцями під час встановлення (можна відокремити м’якою тканиною або папером), щоб уникнути на лампі відбитків пальців та іншого бруду, що вплине на термін служби лампи. ②Поставте корпус лампи на стіл, увімкнувши живлення, за допомогою спеціальної викрутки відрегулюйте отвір ручки фокусування лампи (позначений «←→») так, щоб нитка розжарювання виступала на стіні 1-2 м, і зображення нитки регулюється. Потім відрегулюйте висоту лампи та відрегулюйте отвір для різьби (позначений «──»), щоб положення нитки було відповідним; потім відрегулюйте ліве та праве положення лампи, щоб відрегулювати отвір для гвинта (позначений «──»), щоб зробити ліве та праве положення нитки розжарювання відповідним.
2. Метою перевірки та коригування положення освітлювача джерела світла (нитки розжарення) у мікроскопі є налаштування кінця зображення освітлювача прямо в поле зору лінзи об’єктива та забезпечення того, що поле зору мікроскоп повністю і рівномірно освітлений з точки зору джерела світла. Освітлення, яке є необхідною умовою для налаштування системи освітлення Kuhler. Необхідні основні інструменти: центруючий телескоп укомплектовується разом із мікроскопом. ① Від’єднайте гільзу з матового скла в корпусі лампи та встановіть корпус лампи назад на мікроскоп. ② Виберіть об’єктив 10×, увімкніть програму джерела світла, щоб знайти зразок і чітко сфокусувати його, а потім скористайтеся об’єктивом 40×, щоб чітко сфокусувати зразок (лінза об’єктива 40× Ви можете побачити повне зображення нитки розжарювання). ); ③ Максимально відкрийте діафрагму апертури та діафрагму поля конденсора; ④ Від'єднайте один з окулярів, замініть центруючий телескоп, візьміться за білу частину, іншою рукою розтягніть чорний окуляр. Ви можете побачити зображення нитки в полі зору; ⑤ Якщо положення нитки не підходить, відрегулюйте отвір «──», щоб відрегулювати зображення нитки в горизонтальному напрямку, і відрегулюйте отвір «──», щоб відрегулювати зображення нитки у вертикальному напрямку, поки не відрегулюєте зображення нитки. до світлового кругового зображення, яке просто заповнює отвір лінзи об’єктива; ⑥ Після налаштування вставте матову скляну втулку назад у вихідне положення, від'єднайте центруючий телескоп і замініть окуляр для наступного налаштування. Вищезазначене регулювання камери джерела світла для лампи поза мікроскопом і перевірку положення світного тіла джерела світла всередині мікроскопа необхідно виконувати лише під час першого встановлення та налагодження мікроскопа та під час заміни лампочки. , і мікроскоп не можна регулювати випадковим чином під час використання мікроскопа. У разі плутанини його можна відкоригувати до початкового стану згідно з описаними вище кроками.
3. Правильне налаштування системи освітлення Келера Одним із основних завдань правильного налаштування мікроскопа є налаштування системи освітлення оптичного шляху, а ключовим є налаштування системи освітлення Колера. Кожен, хто користується мікроскопом, особливо той, хто робить мікрофотографії, повинен мати певне розуміння та володіння принципом системи освітлення Кюлера та етапами її налаштування, щоб повністю використовувати функції мікроскопа та робити знімки. Отримані фотографії можуть бути більш послідовними та ідеальними. Принцип системи освітлення Колера простий: світло, випромінюване будь-якою точкою джерела світла, може освітлювати поле зору мікроскопа, і світло, випромінюване кожною точкою джерела світла, збирається, а в полі З огляду на мікроскоп досягається дуже повне і рівномірне освітлення. Метою налаштування системи освітлення Кюлера є отримання рівномірного та достатнього освітлення для спостережуваного поля зору та запобігання впливу розсіяного світла на систему зображення чи перешкоджанню їй, щоб уникнути запотівання плівки під час фотографування. Необхідні компоненти для високорегульованої системи освітлення Kohler: польова діафрагма, система збиральних лінз, які можна регулювати по осі. ① Виберіть об’єктив 10× і окуляр 10×. ② Помістіть передню лінзу конденсора в оптичний шлях, відрегулюйте діафрагму діафрагми в помірне положення (не надто велике чи маленьке), потім підніміть конденсор до у верхньому положенні та відрегулюйте поворотну платформу конденсора в положення "J" для яскравого поля ③ Відрегулюйте польову діафрагму до мінімуму (0,1)
④ Помістіть запечатаний біологічний зразок на столик, увімкніть джерело світла та чітко сфокусуйтеся
⑤ У полі зору буде частково освітлена ділянка або яскрава пляма, яка є розмитим зображенням польової діафрагми, на якій чітко видно деталі зразка; поза ним темніше поле зору, яке не обов’язково може чітко бачити деталі зразка
⑥Злегка відрегулюйте конденсор вниз, щоб яскрава пляма в полі зору поступово зменшувалась і поступово ставала чітким полігональним зображенням, яке є чітким зображенням польової діафрагми;
⑦Як правило, багатокутне зображення знаходиться не в центрі поля зору, і необхідно відрегулювати пару центруючих гвинтів конденсора, щоб налаштувати багатокутне зображення польової діафрагми в центральне положення;
⑧Поступово відкривайте діафрагму поля зору, щоб зробити багатокутне зображення вписаним багатокутником поля зору, а потім перевірте стан вирівнювання. Якщо вирівнювання не ідеальне, продовжуйте точне налаштування гвинта вирівнювання;
⑨Злегка розкрийте діафрагму поля зору, щоб її багатокутне зображення просто зникло на краю поля зору. Наразі завершено налагодження системи освітлення Kohler. Після налаштування системи освітлення Колера все поле зору освітлюється рівномірно, а мікрофотографії стають яскравими та чіткими з нормальним контрастом.
