За допомогою якого мікроскопа можна побачити форму мікробних клітин
Збірний термін для всіх крихітних організмів, які людям важко спостерігати неозброєним оком. Мікроорганізми включають бактерії, віруси, гриби та деякі водорості. (Однак деякі мікроорганізми видно неозброєним оком, наприклад, гриби, що належать до грибів, Ganoderma lucidum тощо.) Віруси є типом «неклітинних організмів», що складаються з кількох компонентів, таких як нуклеїнові кислоти та білки, але їх виживання має залежати від живих клітин. Відповідно до різних середовищ, які існують, їх можна розділити на прокаріотичні мікроорганізми, космічні мікроорганізми, грибкові мікроорганізми, дріжджові мікроорганізми, морські мікроорганізми тощо.
Роль і шкода мікроорганізмів:
Одним із найважливіших впливів мікроорганізмів на людину є поширеність інфекційних захворювань. 50 відсотків захворювань людини викликані вірусами. Історія мікробів, що спричиняють хвороби людини, — це історія постійної боротьби людини з ними. Люди досягли значного прогресу в профілактиці та лікуванні захворювань, але продовжують з’являтися нові та знову з’являтися мікробні інфекції, наприклад, велика кількість вірусних захворювань, для яких відсутні ефективні терапевтичні препарати. Патогенний механізм деяких захворювань не ясний. Зловживання великою кількістю антибіотиків широкого спектру дії спричинило сильний тиск селекції, спричинивши мутацію багатьох штамів, що призвело до появи стійкості до ліків, а здоров’ю людини загрожують нові загрози. Деякі сегментовані віруси можуть мутувати шляхом рекомбінації або перегрупування. Найбільш типовим прикладом є вірус грипу.
Ознайомившись із конкретним визначенням мікроорганізмів, який тип мікроскопа повинен використовувати експериментатор під час вивчення мікроорганізмів, щоб побачити, і який мікроскоп можна використовувати, щоб краще бачити, а також спостерігати та аналізувати загальні мікробні форми.
Винахід мікроскопа полягає в тому, щоб мати можливість бачити усміхнені об’єкти, які неможливо побачити неозброєним оком. Розміри мікроорганізмів дуже малі, тому їх необхідно збільшувати і спостерігати за допомогою мікроскопа. Крім того, існує багато типів мікроорганізмів, тому в основному більшість оптичних мікроскопів можуть спостерігати за мікроорганізмами, наступне питання полягає в тому, який тип мікроскопа слід використовувати для спостереження та аналізу мікроорганізмів. Загальні мікроскопи для спостереження мікробної морфології включають біологічні мікроскопи, фазово-контрастні мікроскопи, інвертовані мікроскопи, флуоресцентні мікроскопи та конфокальні мікроскопи. Мікроскоп і так далі.
Нижче наведено опис різних мікроскопів, які використовуються для спостереження за мікроорганізмами:
1. Звичайний світловий мікроскоп
Як джерело світла використовується природне світло або світло, довжина хвилі якого становить близько {{0}},4 мкм. Роздільна здатність мікроскопа становить половину довжини хвилі, тобто 0,2 мкм, а найменше зображення, видиме неозброєним оком, становить 0,2 мм. Таким чином, використання масляного (іммерсійного) дзеркала для збільшення в 1000 разів може збільшити частинки розміром 0,2 мкм до 0,2 мм, видимих неозброєним оком. Для спостереження бактерій, актиноміцетів і грибів можна використовувати звичайні оптичні мікроскопи.
2. Темнопольна мікроскопія зазвичай використовується для спостереження за морфологією та рухом незабарвлених мікробів. Після встановлення конденсора темного поля в звичайний мікроскоп світло не може проникати безпосередньо з середини, і поле зору темне. Коли зразок отримує косе світло від краю конденсора, воно може розсіюватися, тому на тлі темного поля можна спостерігати яскраві мікроорганізми, наприклад бактерії або спірохети.
3. Фазово-контрастний мікроскоп. Фазово-контрастний мікроскоп використовує світловий ефект пластини різниці фаз для зміни фази світла та амплітуди прямого світла та перетворення різниці фази світла в різницю інтенсивності світла. Під фазово-контрастним мікроскопом, коли світло проходить через незабарвлений зразок, різниця у фазі світла спричинена невідповідністю щільності різних частин зразка, і можна спостерігати морфологію, внутрішню структуру та спосіб руху мікроорганізмів.
4. Флуоресцентний мікроскоп Флуоресцентний мікроскоп в основному такий самий, як і звичайний оптичний мікроскоп, головною відмінністю є джерело світла, фільтр і конденсор. В даний час більшість з них використовують прилади epi-light, а в якості джерел світла зазвичай використовують ртутні лампи високого тиску, які можуть випромінювати ультрафіолетове або синьо-фіолетове світло. Існує два види фільтрів: фільтр збудження і фільтр поглинання. На додаток до загальних конденсаторів світлого поля, конденсатори темного поля також можна використовувати у флуоресцентних мікроскопах, які використовують синє світло для посилення контрасту між флуоресценцією та фоном. Цей метод застосовний для виявлення або ідентифікації бактерій, пофарбованих флуоресцентними пігментами або в поєднанні з флуоресцентними антитілами.
5. Електронні мікроскопи використовують потік електронів як джерело світла. У порівнянні з видимим світлом довжина хвилі відрізняється в десятки тисяч разів, що значно покращує роздільну здатність. Магнітна котушка використовується як система оптичного підсилення, а збільшення може досягати десятків тисяч або сотень тисяч разів. Його часто використовують у вірусних частинках. і спостереження бактеріальної ультраструктури.
Спостереження за незабарвленими мікробними зразками:
Незабарвлені зразки зазвичай можна використовувати для спостереження за морфологією бактерій, потужністю та рухом. Бактерії безбарвні і прозорі, якщо вони не забарвлені, і спостерігаються під мікроскопом головним чином за різницею між показником заломлення бактерій і навколишнього середовища. Бактерії з джгутиками рухаються енергійно, тоді як бактерії без джгутиків демонструють нерегулярний броунівський рух. Життєздатні бактерії, такі як Treponema pallidum, Leptospira та Campylobacter, мають характерні форми та моделі руху, які мають діагностичне значення. Зазвичай використовуються такі методи: метод падіння тиску, метод падіння підвіски та капілярний метод.
1. Метод висячої краплі Нанесіть вазелін навколо увігнутого отвору чистого увігнутого предметного скла, візьміть кільце бактеріальної суспензії з інокуляційною петлею та помістіть його в центр покривного скла, потім вирівняйте увігнутий отвір увігнутого предметного скла з крапельку в центрі покривного скла та надіньте кришку, потім швидко переверніть її, злегка натисніть на покривне скло, щоб воно щільно прилипло до вазеліну на краю увігнутого отвору, а потім спостерігайте під високою потужністю мікроскоп (або темне поле).
2. Візьміть кільце бактеріальної суспензії з інокуляційною петлею та помістіть його в центр чистого предметного скла за допомогою перепаду тиску та обережно накрийте бактеріальну суспензію покривним склом, намагаючись уникнути утворення бульбашок повітря та запобігання бактеріальної суспензії від переповнення. Світлопольне (або темнопольне) спостереження під світлодіодним об’єктивом.
3. Капілярний метод в основному використовується для дослідження кінетики анаеробних бактерій. Зазвичай вибирають довжину 60~70мм. Після сифонування суспензії анаеробних бактерій через капіляр з отвором 0.5-1.0 мм, закрийте два кінці капіляра полум’ям. Капіляр фіксували на предметному склі пластиковим папером і спостерігали під світлодіодною лінзою в темному полі.
Спостереження пофарбованих мікробних зразків за допомогою мікроскопа:
Після фарбування бактеріального зразка через різкий контраст кольору між бактеріями та навколишнім середовищем можна визначити морфологічні характеристики бактерій (такі як розмір, форма, розташування тощо) бактерій і деякі особливі структури. чітко спостерігаються під звичайним оптичним мікроскопом (наприклад, капсули, джгутики, спори тощо), і бактерії можна класифікувати та ідентифікувати відповідно до реактивності фарбування.
(1) Загальна процедура бактеріального фарбування Загальна процедура бактеріального фарбування така: мазок (висушування) — фіксація — фарбування.
1. Приготування мазка крові, виділень, виділень, пункційної рідини та рідких культур, а також прямі мазки тонкої плівки на предметному склі; розтин або інфіковані тканини тварини, змастіть вогнище ураження ватним тампоном для взяття зразка. Для підготовки бактеріальних колоній або газонів на твердому середовищі спочатку використовуйте інокуляційну петлю, щоб взяти кільце нормального фізіологічного розчину та помістити його в центр предметного скла, потім скористайтеся стерильною інокуляційною петлею, щоб взяти невелику кількість культури та подрібнити її Рівномірно розподіліть у звичайному фізіологічному розчині та розподіліть на 1 см2 великих або малих пофарбованих поверхонь, дайте йому висохнути природним шляхом при кімнатній температурі або повільно висушіть на відстані.
2. Метою фіксації є знищення бактерій, коагуляція бактеріального білка та структури та полегшення фарбування; сприяти прилипанню бактерій до предметного скла, щоб уникнути змивання водою під час миття; змінюють проникність бактерій для барвників, що сприятливо впливає на структуру бактеріальних клітин фарбування. Зазвичай його фіксують нагріванням полум'ям, а висохлий мазок швидко пропускають через полум'я 3 рази. При дотику до предметного скла шкіру на тильній стороні долоні краще не обпалити.
3. Фарбування Відповідно до різних цілей перевірки, виберіть різні методи фарбування для фарбування. Під час фарбування додайте розчин барвника по краплях, щоб збільшити покривність.
4. Протрава Будь-яка речовина, яка може посилити спорідненість між барвником і пофарбованим об’єктом, закріпити барвник на пофарбованому об’єкті та викликати зміну проникності клітинної мембрани, називається протравою. Зазвичай використовуються галун, дубильна кислота, солі металів та йод тощо, а нагрівання також використовується для сприяння забарвленню. Морилки можна використовувати між первинним фарбуванням і контрастним фарбуванням, а також після фіксації або містити в фіксаторі та фарбуванні.
5. Знебарвлення Будь-який хімічний агент, який може видалити колір пофарбованого предмета, називається знебарвлювачем. Як знебарвлювачі зазвичай використовують етанол, ацетон тощо. Знебарвлюючий агент може виявити ступінь стійкості комбінації бактерій і барвників, що може бути використано для диференціального фарбування.
6. Контрастне фарбування Бактерії або їхні структури, які були знебарвлені, часто контрастують розчином для контрастного фарбування для зручності спостереження. Колір розчину контрастного фарбування відрізняється від кольору розчину основного фарбування, утворюючи різкий контраст. Контрфарбування не повинно бути занадто сильним, щоб не замазати колір початкового фарбування.
