Які вимоги до зразків для світлової мікроскопії?
У процесі підготовки зразка в оптичному мікроскопі товщина зрізу зразка становить від 2 до 25 мкм; товщина зрізу електронного мікроскопа знаходиться в межах 50-100 нм (за винятком високовольтного електронного мікроскопа, товщина зразка може досягати 1 мкм), тому метод нарізки використовується не однаково.
З точки зору носія, носієм секції оптичного мікроскопа є предметне скло, а носієм секції електронного мікроскопа є несуча сітка.
З точки зору фіксації зрізи оптичного мікроскопа фіксують складним фіксатором, тоді як зрізи електронного мікроскопа багаторазово фіксують одним фіксатором.
З точки зору фарбування, фарбування оптичних зразків відносно просте. Відповідно до різних зразків спостереження та типу оптичного мікроскопа зазвичай достатньо використовувати кілька фіксованих плям. Існує багато методів повторного фарбування зразків електронного мікроскопа, і вони також дуже складні, наприклад, негативне фарбування, фарбування сріблом тощо.
Що стосується заливки, то для зрізів оптичного мікроскопа в якості заливки використовують парафін, колодій, желатин і ін.; епоксидна смола, полістирольна смола, ізобутиленова смола та водорозчинна смола використовуються як заливні агенти для секцій електронного мікроскопа.
Для того, щоб поле зору мікроскопа отримувало рівномірне та достатнє освітлення, необхідно налаштувати систему освітлення оптичного шляху під час першого встановлення та налагодження мікроскопа. вимоги. Крім того, правильне розуміння системи оптичного шляху освітлення є необхідним кроком після заміни лампочки в процесі використання мікроскопа, а також необхідним засобом час від часу перевіряти роботу мікроскопа в процес щоденного використання. Налаштування системи оптичного шляху освітлення мікроскопа в основному включає наступні 4 пункти: 1. Попереднє налаштування камери лампи джерела освітлення поза мікроскопом ① Спочатку відкрийте корпус камери лампи та вставте галогенну лампу в патрон, натиснувши кнопку пружинний затиск. Такий бруд, як відбитки пальців, що залишився на лампі, вплине на термін служби лампи. ②Помістіть кімнату з лампою на стіл, увімкнувши живлення, за допомогою спеціальної викрутки відрегулюйте отвір ручки фокусування лампи (позначений «←→») так, щоб нитка розжарювання виступала на стіні 1-2 м, і зображення нитки регулюється. Потім відрегулюйте висоту лампи, щоб відрегулювати отвір для нитки розжарювання (позначений «──»), щоб положення нитки було відповідним; потім відрегулюйте гвинтові отвори для регулювання лівого та правого положення лампи (позначені «──»), щоб зробити ліве та праве положення нитки розжарювання відповідним.
2. Метою перевірки та корекції положення освітлювача (нитки) джерела світла в мікроскопі є налаштування кінця зображення освітлювача в поле зору лінзи об’єктива та переконання, що поле зору мікроскопа повністю й рівномірно сприймається з точки зору джерела світла. Освітлення, яке є необхідною умовою для налаштування системи освітлення Kühler. Потрібні основні інструменти: Центрувальні телескопи оснащені мікроскопом. ① Від'єднайте гільзу з матового скла в корпусі лампи та поставте корпус лампи назад на мікроскоп. ② Виберіть об'єктив 10×, увімкніть програму джерела світла, щоб знайти зразок і чітко налаштувати фокус, а потім скористайтеся об'єктивом 40× лінза для чіткого фокусування зразка (лінза об’єктива 40×. Повне зображення нитки можна чітко побачити); ③ Максимально відкрийте апертурну діафрагму та польову діафрагму конденсора; ④ Від'єднайте один з окулярів, замініть його центруючим телескопом, візьміться за білу частину та витягніть чорний окуляр іншою рукою. Зображення нитки можна побачити в полі зору; ⑤Якщо положення нитки не підходить, відрегулюйте отвір «──», відрегулюйте зображення нитки в горизонтальному напрямку, відрегулюйте отвір «──» і відрегулюйте зображення нитки у вертикальному напрямку, доки Налаштуйте зображення нитки до круглого зображення, яке просто заповнює отвір лінзи об’єктива; ⑥ Після налаштування вставте матову скляну втулку назад у вихідне положення, від'єднайте центруючий телескоп і замініть окуляр для наступного налаштування. Згадане вище налаштування кімнати джерела світла з лампою освітлення поза мікроскопом і калібрування положення освітлювача джерела світла всередині мікроскопа необхідно виконувати лише тоді, коли мікроскоп встановлено та налагоджено вперше, а лампочка включена. замінено. У разі плутанини ви можете відновити його до початкового стану відповідно до наведених вище кроків.
3. Правильне налаштування системи освітлення Колера (Kohler) Правильне налаштування мікроскопа, одним із основних завдань є налаштування системи освітлення світлового шляху, а ключовим є налаштування системи освітлення Колера. Усі, хто користується мікроскопами, особливо ті, хто робить мікрофотографії, повинні мати певне розуміння та володіння принципами системи освітлення Кюлера та етапами її налаштування, щоб вони могли повністю використовувати функції мікроскопа. Отримані фотографії можуть бути більш послідовними та ідеальними. Принцип системи освітлення Кюлера простий: світло, випромінюване будь-якою точкою опромінювача джерела світла, може освітлювати поле зору мікроскопа, а світло, випромінюване кожною точкою опромінювача джерела світла, збирається, і воно знаходиться в поле зору мікроскопа. Досягається дуже достатнє і рівномірне освітлення. Метою налаштування системи освітлення Кюлера є отримання рівномірного та достатнього освітлення для спостережуваного поля зору та запобігання впливу розсіяного світла на систему зображення або перешкоджанню їй, щоб уникнути утворення туману на негативі під час фотографування. Основні компоненти високорегульованої системи освітлення Kühler: польова діафрагма, конденсаторна система з регулюванням по осі. ① Виберіть об’єктив 10× і окуляр 10×. ② Помістіть передню лінзу конденсора в оптичний тракт, відрегулюйте діафрагму діафрагми в помірне положення (не надто велику або не надто маленьку), потім підніміть конденсор у верхнє положення та відрегулюйте поворотну платформу конденсора в положення «J» для яскравого поля ③ Відрегулюйте польову діафрагму до мінімуму (0,1)
④ Помістіть запечатаний біологічний зразок на столик, увімкніть джерело світла та чітко сфокусуйтеся
⑤ У полі зору з’явиться локально освітлена ділянка або яскрава пляма, яка є розмитим зображенням польової діафрагми, на якій чітко видно деталі зразка; Чітко дивіться деталі зразка
⑥ Злегка опустіть конденсор, щоб яскрава пляма в полі зору поступово звужувалась і поступово ставала чітким полігональним зображенням, яке є чітким зображенням польової діафрагми;
⑦ За звичайних обставин полігональне зображення не знаходиться в центрі поля зору. Необхідно відрегулювати пару центруючих гвинтів конденсора, щоб привести полігональне зображення поля зору до центрального положення;
⑧ Поступово відкривайте діафрагму поля зору, щоб багатокутне зображення стало вписаним багатокутником поля зору, а потім перевірте умову вирівнювання. Якщо вирівнювання не ідеальне, продовжуйте злегка регулювати вирівнювальний гвинт;
⑨ Злегка відкрийте польову діафрагму, щоб полігональне зображення зникло на краю поля зору. На цьому налаштування системи освітлення Kühler завершено. Після налаштування системи освітлення Кюлера все поле зору освітлювалося рівномірно, а мікрофотографії були яскравими та чіткими з нормальним контрастом.
