Існує два типи флуоресцентних мікроскопів залежно від їх світлових шляхів:
1. Просвічуючий флуоресцентний мікроскоп: джерело збуджуючого світла використовується для збудження флуоресценції шляхом проходження матеріалу зразка через конденсорну лінзу. Також можна використовувати звичайні концентратори темного поля, а звичайні концентратори можна використовувати для налаштування рефлектора для перенаправлення та бокового спрямування збуджуючого світла на зразок. Це відносно старомодний флуоресцентний мікроскоп. Його перевагою є сильна флуоресценція при малому збільшенні, але його недоліком є те, що його флуоресценція зменшується зі збільшенням збільшення. Тому це краще для спостереження за більшими матеріалами зразків.
2. Флуоресцентний мікроскоп падаючого світла — це новий тип флуоресцентного мікроскопа, розроблений у наш час. На відміну від вищезазначеного, світло збудження падає від лінзи об’єктива вниз на поверхню зразка, використовуючи ту саму лінзу об’єктива, що й конденсор освітлення, і лінзу об’єктива для збору флуоресценції. Двоколірний розсіювач променя потрібно додати до оптичного шляху, який знаходиться на 45 градусів від легкого урану. Під кутом збудження світло відбивається в об'єктив і фокусується на зразку. Флуоресценція, створена зразком, а також збуджувальне світло, відбите від поверхні лінзи об’єктива та покривного скла, потрапляють в лінзу об’єктива та повертаються до подвійного кольорового розсіювача променя, розділяючи збуджувальне світло та флуоресценцію. Потім залишкове світло збудження поглинається блокуючим фільтром. Якщо використовуються різні комбінації фільтрів збудження/двокольорових сепараторів променя/блокувальних фільтрів, вони можуть задовольнити потреби різних флуоресцентних продуктів реакції. Перевагами цього флуоресцентного мікроскопа є рівномірне освітлення поля, чітке зображення та сильніша флуоресценція з більшим збільшенням.
Інструкція з використання флуоресцентного мікроскопа
1. Увімкніть джерело світла. Для досягнення максимальної яскравості ртутну лампу надвисокого тиску необхідно попередньо нагріти протягом кількох хвилин.
2. Просвічуюча флуоресцентна мікроскопія вимагає встановлення необхідного фільтра збудження між джерелом лампи та конденсором, а також відповідного блокуючого фільтра за лінзою об’єктива. Флуоресцентний мікроскоп падаючого світла повинен вставити необхідний фільтр збудження/подвійний світлорозділювач/блок блокуючого фільтра в слот оптичного шляху.
3. Спостерігайте за допомогою малопотужного мікроскопа та відрегулюйте центр джерела світла відповідно до пристрою налаштування різних типів флуоресцентних мікроскопів, щоб він знаходився в центрі всієї плями освітлення.
4. Розмістіть зразок і сфокусуйте його для спостереження. Слід звернути увагу під час використання: Не спостерігайте безпосередньо очима перед встановленням фільтра, щоб уникнути пошкодження очей; При дослідженні зразків за допомогою масляного мікроскопа слід використовувати спеціальний нефлуоресцентний масляний мікроскоп; Після вимкнення ртутної лампи високого тиску її не можна відразу включити знову. Перезапуск займає 5 хвилин, інакше він буде нестабільним і вплине на термін служби ртутної лампи.
(3) Спостерігаючи під флуоресцентним мікроскопом на навчальній платформі з використанням синьо-фіолетового світлофільтра, можна побачити клітини, пофарбовані 0.01% акридиновим оранжевим флуоресцентним барвником. Ядро і цитоплазма збуджені для створення двох різних кольорів флуоресценції (темно-зеленого і оранжево-червоного).
