Різниця між лазерним конфокальним мікроскопом і традиційним оптичним мікроскопом
Лазерна скануюча конфокальна флуоресцентна мікроскопія — це відносно передовий інструмент аналізу молекулярної та клітинної біології, який використовує комп’ютер, лазер і технологію обробки зображень для отримання тривимірних даних біологічних зразків. Він в основному використовується для спостереження за структурою живих клітин і біологічними змінами конкретних молекул та іонів, кількісного аналізу та кількісного визначення в реальному часі.
Принцип лазерної конфокальної мікроскопії: використовуйте отвір для освітлення, розміщений за джерелом світла, і отвір для виявлення, розміщений перед детектором, щоб реалізувати точкове освітлення та точкове виявлення. Світло, що випромінюється від джерела світла через отвір для освітлення, фокусується в точці на фокальній площині зразка, і випромінювана флуоресценція з цієї точки відображається на отворі для виявлення, а будь-яке світло, що випромінюється поза цією точкою, блокується виявленням отвір. Точка освітлення та точка виявлення сполучені з точкою опромінення або виявленою точкою, тому виявлена точка є конфокальною точкою, а площина, де розташована виявлена точка, є конфокальною площиною.
Комп’ютер відображає виявлені точки на екрані комп’ютера у вигляді точок зображення. Щоб створити повне зображення, система сканування на оптичному шляху сканує фокальну площину зразка для створення повного конфокального зображення. Поки столик рухається вгору та вниз уздовж осі Z, новий шар зразка переміщується до конфокальної площини, і новий шар зразка відображається на моніторі. При безперервному переміщенні осі Z можна отримати безперервні зображення різних шарів зразка. Легке вирізане зображення.
Різниця між традиційними світловими мікроскопами
Традиційні флуоресцентні мікроскопи мають непереборний недолік: флуоресцентні структури поза фокальною площиною розмиті та розмиті. Причина в тому, що більшість біологічних зразків мають перекриваючі структури. Якщо флуоресцентно мічені структури розподіляються на різних рівнях і перекриваються, розсіяна флуоресценція зверху або знизу фокальної площини також сприймається лінзою об’єктива, і роздільна здатність флуоресцентного мікроскопа буде значно покращена. зменшити.
На основі традиційних оптичних мікроскопів лазерні скануючі конфокальні мікроскопи використовують лазерне світло як джерело світла, застосовують принцип і пристрій сполученого фокусування та використовують комп’ютери для обробки цифрових зображень, спостереження, аналізу та виведення спостережуваних об’єктів. Зразок можна сканувати за допомогою томографії та отримати зображення для неруйнівного спостереження та аналізу тривимірної просторової структури клітин. У той же час, використовуючи зонди для імунофлуоресцентного мічення та іонно-флуоресцентного мічення, ця технологія може не тільки спостерігати за фіксованими клітинами та зрізами тканин, але й виконувати динамічне спостереження в реальному часі та детектувати структуру, молекули, іони та життєдіяльність живих клітин, на субклітинному рівні. Спостереження за фізіологічними сигналами, такими як Ca2 plus, значення рН, мембранний потенціал і зміни в морфології клітин, стало новим поколінням потужних інструментів дослідження в галузі морфології, молекулярної клітинної біології, нейронаук, фармакології та генетики.
