Різниця між флуоресцентною та лазерною конфокальною мікроскопією
флуоресцентний мікроскоп
1. Флуоресцентний мікроскоп — це пристрій, який використовує ультрафіолетове світло як джерело світла для освітлення досліджуваного об’єкта, змушуючи його випромінювати флуоресценцію, а потім спостерігати за формою та положенням об’єкта під мікроскопом. Флуоресцентна мікроскопія використовується для вивчення поглинання, транспортування, розподілу та локалізації речовин у клітинах. Деякі речовини в клітинах, наприклад хлорофіл, можуть випромінювати флуоресценцію після впливу ультрафіолетового випромінювання; Деякі речовини самі по собі можуть не випромінювати флуоресценцію, але якщо їх пофарбувати флуоресцентними барвниками або флуоресцентними антитілами, вони також можуть випромінювати флуоресценцію під ультрафіолетовим випромінюванням. Флуоресцентна мікроскопія є одним із інструментів для якісного та кількісного дослідження цих речовин.
2. Принцип роботи флуоресцентного мікроскопа:
(A) Джерело світла: джерело світла випромінює світло різних довжин хвиль (від ультрафіолетового до інфрачервоного).
(B) Джерело світла фільтра збудження: пропускання світла певної довжини хвилі, яке може викликати флуоресценцію в зразку, блокуючи при цьому світло, марне для збудження флуоресценції.
(C) Флуоресцентні зразки: зазвичай пофарбовані флуоресцентними пігментами.
(D) Блокуючий фільтр: вибірково пропускає флуоресценцію, блокуючи збуджувальне світло, яке не було поглинуте зразком, і деякі довжини хвиль також вибірково пропускаються під час флуоресценції. Мікроскоп, який використовує ультрафіолетове світло як джерело світла для випромінювання флуоресценції від опромінюваного об’єкта. Електронний мікроскоп уперше зібрали Норр і Гарроска в Берліні, Німеччина, у 1931 році. У цьому типі мікроскопа замість пучка світла використовується високошвидкісний електронний промінь. Завдяки значно коротшій довжині хвилі потоку електронів порівняно зі світловими хвилями збільшення електронного мікроскопа може досягати 8{3}}0000 разів із мінімальною роздільною здатністю 0,2 нанометра. Скануючий електронний мікроскоп, який почали використовувати в 1963 році, дозволяє людям бачити крихітні структури на поверхні предметів.
3. Область застосування: Використовується для збільшення зображень невеликих об'єктів. Зазвичай використовується для спостереження за біологією, медициною, мікроскопічними частинками тощо.
конфокальний мікроскоп
1. Конфокальний мікроскоп додає до шляху відбитого світла напіввідбивну лінзу, яка згинає відбите світло, яке вже пройшло через лінзу, в інших напрямках. Є перегородка з отвором у фокусі, а маленький отвір розташований у фокусі. За перегородкою знаходиться фотопомножувач. Можна уявити, що відбите світло до та після фокусної точки світла виявлення не може бути сфокусовано на маленькому отворі через цю конфокальну систему та буде заблоковано перегородкою. Отже, фотометр вимірює інтенсивність відбитого світла в точці фокусу.
2. Принцип: традиційні оптичні мікроскопи використовують польові джерела світла, і зображення кожної точки на зразку буде залежати від дифракції або розсіяного світла від сусідніх точок; Лазерний скануючий конфокальний мікроскоп використовує лазерний промінь для формування точкового джерела світла через освітлену точку для сканування кожної точки у фокальній площині зразка. Освітлена точка на зразку відображається в отворі виявлення та отримується точка за точкою або лінією за допомогою фотоелектронного помножувача (ФЕУ) або пристрою термоелектричного зв’язку (cCCD) після отвору виявлення, швидко формуючи флуоресцентне зображення на моніторі комп’ютера. екран. Освітлювальний отвір і отвір виявлення сполучені відносно фокальної площини лінзи об’єктива. Точки на фокальній площині одночасно фокусуються на точці освітлення та точці випромінювання, а точки за межами фокальної площини не будуть зображені на точці виявлення. Це призводить до конфокального зображення, яке представляє оптичний переріз зразка, подолавши недолік розмитих зображень у звичайній мікроскопії.
3. Сфери застосування: медицина, дослідження тварин і рослин, біохімія, бактеріологія, клітинна біологія, тканини та ембріони, харчові науки, генетика, фармакологія, фізіологія, оптика, патологія, ботаніка, нейронаука, морська біологія, матеріалознавство, електроніка, механіки, нафтової геології та мінералогії.
