Технічні параметри та навички використання флуоресцентного мікроскопа
Технічні параметри флуоресцентного мікроскопа 1. Ширококутний окуляр 2. Ахроматична лінза об’єктива 3. Конвертер об’єктива з чотирма отворами 4. Пристрій падаючої флуоресценції Синя (B) Зелена (G) система збудження 100 Вт ртутна лампа 5. Коаксіальний грубий Механізм мікрофокусування: діапазон фокусування 15 мм Величина мікросітки 0,002 мм 6. Двошаровий механічний верстак Діапазон поздовжнього переміщення: 70 мм Діапазон бокового переміщення: 50 мм
Технічні параметри флуоресцентного мікроскопа
1. Ширококутний окуляр
2. Ахроматична лінза об'єктива
3. Конвертер об'єктива з чотирма отворами
4. Пристрій падаючої флуоресценції Синій (B) Зелений (G) Система збудження Ртутна лампа 100 Вт
Механізм коаксіального грубого мікрофокусування: діапазон фокусування: 15 мм, значення мікросітки: 0,002 мм
6. Двошаровий механічний верстак
Діапазон поздовжнього переміщення: 70 мм Діапазон бічного переміщення: 50 мм
Поради та методи використання флуоресцентної мікроскопії
（1） Слайд
Товщина предметного скла має бути від 0,8 до 1,2 мм. Якщо предметне скло занадто товсте, з одного боку, воно поглинає занадто багато світла, а з іншого боку, воно не може спричинити накопичення збуджувального світла на зразку. Предметне скло має бути гладким і чистим, однакової товщини та без значної спонтанної флуоресценції. Іноді потрібні предметні скла з кварцового скла.
（2） Покривне скло
Товщина покривного скла становить близько 0,17 мм, воно гладке та чисте. Для посилення збудження також можна використовувати інтерференційне покривне скло. Це спеціальне покривне скло, покрите декількома шарами речовин (наприклад, фториду магнію), які мають різну інтерференційну дію на різних довжинах світлових хвиль. Це може забезпечити плавне проходження флуоресценції, одночасно відображаючи збудження, яке може збудити зразок.
（3） Зразок
Зрізи тканин або інші зразки не повинні бути надто товстими. Наприклад, якщо вони занадто товсті, більша частина збуджувального світла споживається в нижній частині зразка, тоді як верхня частина, яку безпосередньо спостерігає лінза об’єктива, не збуджується достатньо. Крім того, перекриття клітин або маскування домішок можуть вплинути на судження.
（4） Монтажний засіб
Гліцерин зазвичай використовується як кріпильний агент, і він повинен бути без спонтанної флуоресценції, безбарвним і прозорим. Яскравість флуоресценції яскравіша при pH від 8,5 до 9,5, і її непросто швидко згаснути. Тому еквівалентну суміш гліцерину та 0.5 моль/л карбонатного буферного розчину з pH від 90 до 9,5 зазвичай використовують як кріпильний агент.
（5） Масло для дзеркал
Як правило, при використанні флуоресцентного мікроскопа в темному полі та масляного мікроскопа для спостереження за зразками необхідно використовувати масло для лінз. Найкраще використовувати спеціальне нефлуоресцентне масло для лінз, яке також можна замінити згаданим вище гліцерином. Також можна використовувати рідкий парафін, але показник заломлення низький, що незначно впливає на якість зображення.
