Будова та основні вузли люмінесцентного мікроскопа
Флуоресцентна мікроскопія є важливим інструментом імунофлуоресцентної цитохімії. Він складається з основних компонентів, таких як джерело світла, система фільтрів та оптична система. Це використання певної довжини хвилі світла для збудження зразка для випромінювання флуоресценції та спостереження за флуоресцентним зображенням зразка шляхом посилення лінз об’єктива та системи окулярів.
Будова та основні вузли люмінесцентного мікроскопа
(1) Джерело світла
В даний час в якості джерел світла часто використовуються ртутні лампи надвисокого тиску потужністю 200 Вт. Вони виготовлені з кварцового скла, посередині мають форму кулі, а всередину заповнена певна кількість ртуті. Під час роботи розряд між двома електродами викликає випаровування ртуті, і тиск повітря в кульці швидко зростає. Коли ртуть повністю випаровується, вона може досягти 50-70 стандартного атмосферного тиску, і цей процес зазвичай займає близько 5-15 хвилин. Свічення ртутної лампи надвисокого тиску є результатом випромінювання квантів світла при безперервній дисоціації та відновленні молекул ртуті розрядом між електродами. Він випромінює сильне ультрафіолетове і синьо-фіолетове світло, якого достатньо для збудження різних флуоресцентних речовин, тому широко використовується у флуоресцентній мікроскопії.
Ртутні лампи надвисокого тиску також виділяють багато тепла. Таким чином, будинок лампи повинен мати хороші умови розсіювання тепла, а температура робочого середовища не повинна бути занадто високою.
Нову ртутну лампу надвисокого тиску можна запалити без високої напруги на початку використання. Після періоду використання його потрібно запустити при високій напрузі (приблизно 15000 В). Після запуску робоча напруга для обслуговування зазвичай становить 50-60В, а робочий струм становить близько 4А. Середній термін служби ртутної лампи надвисокого тиску потужністю 200 Вт становить близько 200 годин, якщо її використовувати протягом 2 годин кожного разу. Чим коротший час роботи, тим менший термін служби. Якщо його використовувати лише протягом 20 хвилин, термін служби скорочується на 50 відсотків. Тому зведіть до мінімуму кількість запусків при його використанні. Під час використання лампи її світлова віддача поступово знижується. Коли індикатор згасне, зачекайте, поки він охолоне, перш ніж перезапускати. Не вимикайте лампочку відразу після її запалювання, щоб не пошкодити електрод через неповне випаровування ртуті. Зазвичай потрібно почекати 15 хвилин. Через високий тиск ртутної лампи надвисокого тиску та сильні ультрафіолетові промені, перед запалюванням колбу необхідно помістити в камеру лампи, щоб не пошкодити очі та не спровокувати роботу в разі вибуху. .
Схема джерела світла ртутної лампи надвисокого тиску (100 Вт або 200 Вт) і кількох частин, включаючи трансформатор, баласт і запуск. Є система регулювання світного центру колби в камері лампи. За колбою колби встановлений увігнутий відбивач з алюмінієвим покриттям, а спереду — світлозбірна лінза.
Вітчизняна ртутна лампа надвисокого тиску GCQ-200 має хороші характеристики та може замінити імпортні лампи, такі як HBO-200. Середній термін служби більше 200 годин, а ціна відносно низька.
Розроблений у моїй країні простий і портативний пристрій із високотемпературним бромно-вольфрамовим флуоресцентним джерелом світла має невеликі розміри, малу вагу, низьку потужність, подвійне використання змінного та постійного струму (з джерелом живлення постійного струму), його легко носити з собою, використовувати та мати популяризували та застосовували.
(2) Система кольорових фільтрів
Система кольорових фільтрів є важливою частиною флуоресцентного мікроскопа, яка складається з пластини фільтра збудження та пластини фільтра, що натискає. Модель фільтрувальної пластини та назва кожного виробника часто неоднакові. Пластини фільтрів зазвичай називаються за основним кольором, літери спереду позначають колір, літери ззаду позначають скло, а цифри позначають характеристики моделі. мікроскоп олімп
(3) Об'єктив
Можна використовувати різні об’єктиви, але використовуються ахроматичні об’єктиви, оскільки їхня автофлуоресценція мінімальна, а їхні властивості пропускання світла (діапазон довжин хвиль) придатні для флуоресценції. Оскільки яскравість флуоресценції зображення в полі зору мікроскопа пропорційна квадрату світлосили лінзи об’єктива та обернено пропорційна її збільшенню, для покращення яскравості флуоресцентного зображення лінза об’єктива з великим слід використовувати коефіцієнт діафрагми. Особливо при великому збільшенні його ефект дуже очевидний. Тому для зразків із недостатньою флуоресценцією слід використовувати лінзу об’єктива з великим відношенням діафрагми з якомога нижчим окуляром (4×, 5×, 6,3× тощо).
(4) Дзеркало
Відбиваючий шар рефлектора, як правило, має алюмінієве покриття, оскільки алюміній менше поглинає синьо-фіолетову область ультрафіолетового та видимого світла, а відображення становить понад 90 відсотків, тоді як відображення срібла становить лише 70 відсотків. Як правило, використовується плоский відбивач.
(5) Конденсатор
Конденсатори, призначені для флуоресцентної мікроскопії, виготовлені з кварцового скла або іншого скла, прозорого для ультрафіолету. Існує два типи конденсаторів чистого поля та конденсаторів темного поля. Існують також фазово-контрастні концентратори флуоресценції.
(6) Пристрій Epi-light
Новий тип пристрою епілайт полягає в тому, що після того, як світло від джерела світла потрапляє на інтерференційний спектроскопічний фільтр, короткохвильова частина (ультрафіолетове та фіолетово-синє) відбивається завдяки властивостям покриття на фільтрі. Коли фільтр звернений до джерела світла, кут дорівнює 45. Коли він нахилений, він спрямовує вертикально на лінзу об’єктива, а через лінзу об’єктива – на зразок, так що зразок збуджується. У цей час лінза об'єктива безпосередньо виконує роль світлозбірника. У той же час довга частина фільтра (зелена, жовта, червона тощо) є прозорою для фільтра, тому вона не відбиває в напрямку лінзи об’єктива, і фільтр діє як пластина фільтра збудження, оскільки флуоресценція зразка знаходиться в довгохвильовій області видимого світла, може пройти через фільтр і досягти окуляра для спостереження, яскравість флуоресцентного зображення зростає зі збільшенням збільшення та є сильнішою за світло, що проходить. джерело при великому збільшенні. На додаток до функції пропускного джерела світла, він більше підходить для прямого спостереження за непрозорими та напівпрозорими зразками, такими як товсті зрізи, мембрани фільтрів, колонії та зразки культури тканин. Нові флуоресцентні мікроскопи, розроблені в останні роки, здебільшого використовують епісвітлові пристрої, які називаються епіфлуоресцентними мікроскопами.
