Примітки та поради щодо використання кількох фазово-контрастних мікроскопів
1) Встановити фазово-контрастний прилад: зняти збиральну лінзу звичайного мікроскопа, а на відповідний мікроскоп встановити збиральну лінзу з кільцевою діафрагмою; зняти звичайний об'єктив мікроскопа і замінити його об'єктивом з фазовою пластиною; замінити окуляр на фокусуючі окуляри для фазово-контрастних мікроскопів; спеціальні зелені фільтри (іноді не потрібні) розміщують на світловході джерела світла.
2) Вирівнювання світла та фокус: відрегулюйте окуляр для фокусування та гвинт регулювання товщини, доки в полі зору не буде чітко видно біле та чорне коло. Чорне коло фіксується, а біле коло можна переміщати, регулюючи гвинт на конденсаторному пристрої, так щоб чорне коло і біле коло повністю збігалися. Зніміть фокусуючий окуляр і замініть його оригінальним окуляром мікроскопа для перевірки.
Аналіз проблем використання фазово-контрастного мікроскопа
1. Вплив товщини зразка Під час спостереження за фазовим контрастом товщина зразка має бути 5 мкм або менше. При використанні більш товстого зразка верхній шар зразка буде дуже чітким, але глибокий шар буде розмитим і спричинить перешкоди зсуву фази. і розсіювання світла.
2. Вплив покривного та предметного скла. Зразок необхідно накрити покривним склом, інакше яскраве кільце кільцевої діафрагми та темне кільце фазової пластини важко перекрити. Спостереження за фазовим контрастом також пред'являє високі вимоги до якості предметного та покривного скла. Якщо є подряпини, нерівномірна товщина або нерівності, виникнуть яскраві спотворення кільця та фазові перешкоди. Крім того, коли слайд занадто товстий або занадто тонкий, яскраве кільце кільцевої діафрагми стане більшим або меншим.
3. Ефект ореолу та згасання. У процесі формування зображення фазово-контрастного мікроскопа, коли структура стає темною через фазову затримку, це не втрата світла, а результат перерозподілу світла на площині зображення. Таким чином, світло, яке очевидно втрачається в темних областях, буде виглядати як яскравий ореол навколо темніших об’єктів. Це є недоліком фазово-контрастної мікроскопії, який заважає спостереженню тонких структур, а явище гало більш серйозне, коли кільцева діафрагма дуже вузька. Іншим явищем у фазово-контрастній мікроскопії є ефект затінення, який означає втрату контрасту на краях більшої області з тією самою фазовою затримкою при спостереженні за допомогою фазового контрасту.
4. Фазова інверсія. Коли n'n, світлий і темний контраст зображення прямо протилежний, що називається фазовою інверсією. Це нерозпізнано, коли різниця фаз δ=0, а контраст стає більшим із збільшенням δ, а інверсія фази з’явиться, коли δ продовжує збільшуватися до певного значення. При використанні об’єктива з високим значенням поглинання 90 (висока контрастність) це значення перетворення становить близько 0.55λ, а при використанні об’єктива зі стандартним значенням поглинання 70 відсотків воно становить приблизно 0,33λ . Об’єктиви з вищими значеннями поглинання слід використовувати для визначення менших оптичних різниць шляху.
