Клас мікроскопічної візуалізації 丨Широкополовий флуоресцентний мікроскоп
У програмах для отримання зображень живих клітин широкопольна флуоресцентна мікроскопія полегшує спостереження за динамікою прилиплих клітин, вирощених у спеціальних камерах навколишнього середовища, розміщених на столику мікроскопа. У найпростішій конфігурації стандартний інвертований мікроскоп для тканинних культур, оснащений флуоресцентним освітленням EPI, поєднується з системою детекторів із матрицею зон (зазвичай камерою CCD), відповідними флуоресцентними фільтрами та системою затворів для обмеження надмірного впливу на клітини шкідливого збуджуючого світла. . Основна флуоресцентна мікроскопія покладається на ретельно підібрані інтерференційні фільтри для вибору певної смуги пропускання для освітлення та виявлення випромінюваного світла. Джерела світла включають ртутні, ксенонові та металогалогенні дугові лампи, лазерні системи, що розширюють промінь, і світлодіоди (світлодіоди), для всіх яких потрібні різні характеристики фільтрів. Синтетичні флуорофори, які використовуються у флуоресцентній мікроскопії, мають спектр випромінювання, що охоплює ближню ультрафіолетову, видиму та ближню інфрачервону області. Використання генетично закодованих флуоресцентних білків значно розширило можливості флуоресцентної мікроскопії для візуалізації живих клітин, дозволяючи дослідникам точно націлюватися на цікаві субклітинні області.
Nuohai LS 18, новий тип мікроскопа зі світловим підсвічуванням, незалежно розроблений компанією Nuohai, спеціально розроблений для 3D-зображень високої роздільної здатності прозорих великих зразків тканин і призначений для дослідження різних непошкоджених тканин, таких як мозок, селезінка, тонка кишка. , нирки, легені, серце та пухлина. 3D точна структура органів.
У широкопольній флуоресценції випромінювання повної апертури, зібране об’єктивом мікроскопа, максимізує записаний сигнал, мінімізуючи необхідний час експозиції. Таким чином, зразки можуть бути зображені з дуже короткими періодами освітлення. Основним недоліком широкопольного зображення є те, що флуоресценція з областей, далеких від фокальної площини, як і фоновий сигнал, є небажаним світлом, яке часто затемнює цікаві об’єкти. Таким чином, візуалізація широкого поля дає найкращі результати, коли цікаві елементи великі (наприклад, органели) або дуже точкові за своєю природою. Широка різноманітність зразків живих клітин, у тому числі прикріплені клітини, бактерії, дріжджі та дуже тонкі зрізи тканин, є ідеальними кандидатами для широкопольної флуоресцентної візуалізації, однак більш товсті тканини (понад 5 мікрон) найкраще використовувати з більш прогресивним методом візуалізації.
Хоча було досягнуто багато успіхів у флуоресцентній візуалізації за допомогою синтетичних флуоресцентних барвників, квантових точок і флуоресцентних білків, у деяких випадках корисно поєднувати флуоресценцію з іншими способами візуалізації. Як приклад, DIC можна використовувати в поєднанні з широкопольною флуоресценцією для моніторингу життєздатності клітин і загальної морфології під час вивчення явищ, що представляють інтерес для конкретних мічених мішеней. Отримання DIC і флуоресценції на одному зображенні зазвичай непрактично, але в правильно налаштованому мікроскопі ці два методи можна використовувати послідовно. Таким чином, після візуалізації в режимі епіфлуоресценції зображення ДВС можна отримати з флуоресцентно мічених зразків за допомогою прохідного світла. Два зображення можна об’єднати під час постаналізу. Одночасне отримання зображень DIC і флуоресценції можливе в розширених конфігураціях широкопольного мікроскопа з використанням спектрально розділеного освітлення (наприклад, у видимому та ближньому інфрачервоному діапазоні) і адаптерів подвійної камери або камери з розділеним оглядом. У більшості лазерних скануючих конфокальних мікроскопів зображення можуть бути отримані як у флуоресцентному, так і в режимі DIC одночасно, що усуває потребу в обробці після отримання. Фазовий контраст і контраст модуляції Гофмана також можна використовувати в поєднанні з широкопольною флуоресцентною мікроскопією. Однак у цих методах лінза об’єктива є особливою, будь то фазове кільце чи модуляційна пластина Гофмана, вона призведе до втрати інтенсивності випромінювання на 5-15 відсотків.
Посилання на статтю: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
