Мікробіологічний мікроскоп прямого підрахунку
Експериментальний принцип
Прямий підрахунок під мікроскопом за допомогою гемоцитометра є широко використовуваним методом мікробного підрахунку. Перевага цього методу в тому, що він інтуїтивно зрозумілий і швидкий. Помістіть відповідним чином розведену бактеріальну суспензію (або суспензію спор) у лічильну камеру між предметним склом і покривним склом гемоцитометра та підрахуйте під мікроскопом. Оскільки об’єм лічильної камери фіксований (0,1 мм2), його можна перетворити на загальну кількість мікроорганізмів на одиницю об’єму відповідно до кількості мікроорганізмів, які спостерігаються під мікроскопом. Оскільки цей метод підраховує суму живих і мертвих бактерій, його також називають методом загального підрахунку бактерій.
Гемоцитометр зазвичай являє собою спеціальне предметне скло, на якому чотири канавки утворюють три платформи. Майданчик посередині розділений на дві половини короткою горизонтальною канавкою. На платформі з кожного боку вигравірувана сітка. Кожна сітка поділена на дев'ять великих квадратів. Велика площа посередині — це зал для підрахунку голосів. Мікроорганізми підраховують у лічильній камері.
Шкала кімнати для підрахунку зазвичай має дві специфікації: одна полягає в тому, що великий квадрат ділиться на 16 середніх квадратів, а кожен середній квадрат ділиться на 25 малих квадратів (Малюнок Ⅷ-2); інший — великий квадрат. Квадрат поділено на 25 середніх квадратів, і кожен середній квадрат поділено на 16 маленьких квадратів (Малюнок Ⅷ-1, C). Але незалежно від того, яка дошка для підрахунку, кількість малих квадратів у кожному великому квадраті однакова, тобто 16×25=400 малих квадратів.
Довжина сторони кожного великого квадрата дорівнює 1 мм, а площа кожного великого квадрата — 1 мм2. Після накриття покривного скла висота між предметним склом і покривним склом становить 0.1 мм, отже, об’єм лічильної камери становить 0.1 мм3.
Під час підрахунку зазвичай підраховують загальну кількість бактерій у п’яти середніх квадратах, потім отримують середнє значення кожного середнього квадрата, а потім множать на 16 або 25, щоб отримати загальну кількість бактерій у великому квадраті, а потім перетворюють на загальна кількість бактерій в 1 мл розчину бактерій.
Лабораторне обладнання
Гемоцитометр, мікроскоп, покривне скло, стерильний капіляр;
Експериментальні матеріали
Суспензія Saccharomyces cerevisiae
Експериментальна процедура (метод прямого підрахунку під мікробним мікроскопом)
1. розведення
Правильно розведіть суспензію Saccharomyces cerevisiae. Якщо бактеріальний розчин не густий, його не потрібно розбавляти.
2. Мікроскопічна рахункова кімната
Перед додаванням зразків виконайте мікроскопічний огляд лічильної камери лічильної пластини. Якщо є забруднення, їх потрібно очистити перед підрахунком.
3. додати зразок
Накрийте чистий і сухий гемоцитометричний планшет покривним склом, а потім за допомогою стерильної піпетки з вузьким отвором капніть невелику краплю розведеного розчину Saccharomyces cerevisiae з краю покривного скла (не надто багато), щоб розчин бактерій потрапив у нього. знаходиться близько до розриву вздовж розриву. Капілярний осмос надходить у лічильну камеру сам, а загальну лічильну камеру можна заповнити бактеріальною рідиною. Будьте обережні, щоб не було бульбашок повітря.
4. підрахунок під мікроскопом
Відпочивши протягом 5 хвилин, поставте гемоцитометр на предметний столик мікроскопа, спочатку використовуйте об’єктив із малою оптикою, щоб знайти розташування лічильної камери, а потім переключіться на об’єктив із високою оптикою для підрахунку. Якщо перед підрахунком виявлено, що бактеріальний розчин занадто густий або занадто рідкий, необхідно повторно відрегулювати розведення перед підрахунком. Для загального розведення зразка потрібно близько
Відповідні клітинки: 5-10. Кожна лічильна камера відбирає бактерії в 5 середніх сітках (опціонально 4 кути та центральна сітка) для підрахунку. Бактерії на лінії сітки зазвичай підраховуються лише на верхній і правій лініях. У разі брунькування дріжджів, коли розмір тіла бруньки досягає половини материнської клітини, підраховують дві бактерії. Підрахуйте зразок, щоб обчислити вміст бактерій у зразку на основі значень, підрахованих у двох лічильних камерах.
5. Очищення гемоцитометра
Після використання промийте пластину для підрахунку клітин крові на крані струменем води, не мийте її твердими предметами, а після миття висушіть самостійно або феном. Під час мікроскопічного дослідження спостерігайте, чи є в кожній клітині залишки бактерій або інші осади. Якщо він нечистий, його потрібно багаторазово мити, поки він не стане чистим.
