Вступ до вдосконалених переваг лазерного сканування мультифотонної мікроскопії
Лазерне скануюче багатофотонне мікроскоп є значним поліпшенням оптичної мікроскопії, в основному проявляється у здатності спостерігати глибокі структури живих клітин, фіксованих клітин та тканин, і отримувати чіткі та різкі багатошарові Z-площини структури, а саме оптичні шматочки, які можуть бути використані для побудови тривимірних твердих структур специфіків. Конфокальний мікроскоп використовує джерело лазерного світла, яке розширюється для заповнення всієї фокусної площини об'єктивного об'єктива, а потім сконформується в дуже малі точки на фокусній площині зразка через систему об'єктива об'єктивної лінзи. Відповідно до чисельної діафрагми об'єктивної лінзи, діаметр яскравої точки освітлення приблизно 0. 25-0. 8 мкм, а глибина - приблизно 0. 5-1. 5 мк м. Розмір конфокальної точки визначається конструкцією мікроскопа, довжиною лазерної хвилі, об'єктивними характеристиками, налаштуваннями стану сканування та властивостями зразків. Діапазон освітлення та глибина польового мікроскопа великі, тоді як освітлення конфокального мікроскопа орієнтоване на фокус на фокусній площині. Основна перевага конфокальної мікроскопії полягає в тому, що вона може виконувати тонкі оптичні секції на товстих флуоресцентних зразках (до 5 0 мкм або більше), товщиною приблизно від 0,5 до 1,5 мкм. Серія зображень оптичних зрізів можна отримати шляхом переміщення зразка вгору та вниз за допомогою крокового двигуна Z-осі мікроскопа. Збір інформації про зображення контролюється в площині * * без перешкод із сигналів, що випромінюються з інших положень на зразку. Після усунення впливу фонової флуоресценції та збільшення співвідношення сигнал-шум, контраст та роздільна здатність конфокальних зображень значно покращуються порівняно з традиційними зображеннями флуоресценції. У багатьох зразках складні структурні компоненти переплітаються для формування складних систем, але як тільки можна зібрати достатньо оптичних секцій, ми можемо використовувати програмне забезпечення для реконструкції їх у трьох вимірах. Цей експериментальний метод широко застосовується в біологічних дослідженнях для з'ясування складних структурних та функціональних зв’язків між клітинами або тканинами.
