Ознайомлення з перевагами та недоліками багатофотонного лазерного скануючого мікроскопа
Переваги багатофотонної лазерної скануючої мікроскопії:
1. Збуджене червоним світлом або інфрачервоним світлом розсіювання світла є невеликим, а розсіювання малих частинок обернено пропорційно четвертому ступені довжини хвилі.
2. Більше розсіяних фотонів із секції зображення можна зібрати без проколів.
3. Обскура не може розрізнити розсіяні фотони, що випромінюються з зони поза фокусом або зони фокусування, і співвідношення сигнал/шум багатофотонного зображення в глибоких шарах є хорошим.
4. Ультрафіолетове або видиме світло, яке використовується для однофотонного збудження, легко поглинається та послаблюється зразком до того, як промінь досягне фокальної площини, і збудити глибокі шари нелегко.
5. З точки зору спостереження під біологічним мікроскопом, перш за все слід не пошкодити активний стан самого організму, а також підтримувати циркуляцію води, концентрацію іонів, кисню та поживних речовин. У разі спостереження за світлом і тепло, і енергія фотонів повинні залишатися в межах кількості опромінення та енергії світла, які не пошкоджуватимуть клітини.
6. Багатофотонна мікроскопія має багато переваг. Такі як тривимірна роздільна здатність, глибоке проникнення, ефективність розсіювання, фонове освітлення, співвідношення сигнал/шум, контроль тощо, мають характеристики, яких попередні лазерні мікроскопи не мали або не могли перевершити.
Недоліки багатофотонної лазерної скануючої мікроскопії:
1. Тільки для флуоресцентної візуалізації.
2. Якщо зразок містить хромофори, які поглинають світло збудження, зразок може бути термічно пошкоджений.
3. Роздільна здатність трохи зменшена. Хоча це можна покращити, використовуючи одночасно конфокальну апертуру, сигнал втрачається.
4. Через обмеження дорогих надшвидких лазерів вартість багатофотонного скануючого мікроскопа відносно висока.
