Вступ до багатофотонної лазерної скануючої мікроскопії: переваги та недоліки
1. Збуджене червоним або інфрачервоним світлом розсіювання світла невелике, а розсіювання малих частинок обернено пропорційне четвертому степеню довжини хвилі.
2. Більше розсіяних фотонів із поперечного перерізу зображення можна зібрати без необхідності використання точкових отворів.
3. Точкові дірки не можуть розрізнити розсіяні фотони, що випромінюються з розфокусованих або фокальних областей, а мультифотони мають краще співвідношення сигнал/шум у глибокому зображенні.
4. Ультрафіолетове або видиме світло, яке використовується для збудження одиночного фотона, легко поглинається та послаблюється зразком до того, як промінь досягне фокальної площини, що ускладнює збудження глибоких шарів.
5. З точки зору біологічного мікроскопічного спостереження, перш за все, необхідно не пошкодити активний стан самого організму, підтримувати циркуляцію води, концентрацію іонів, кисню та поживних речовин. У сфері спостереження світла як теплова, так і фотонна енергія повинні залишатися в межах дози опромінення та світлової енергії, які не пошкоджують клітини.
6. Багатофотонна мікроскопія має багато переваг. Що стосується тривимірної роздільної здатності, проникнення в глибину, ефективності розсіювання, фонового освітлення, співвідношення сигнал/шум, контролю тощо, існують характеристики, якими не володіють або не можуть перевершити попередні лазерні мікроскопи.
Недоліки багатофотонного лазерного скануючого мікроскопа:
1. Тільки для флуоресцентної візуалізації.
2. Якщо зразок містить хромофори, які можуть поглинати світло збудження, зразок може бути підданий термічному пошкодженню.
3. Роздільна здатність трохи знижена, хоча її можна покращити, одночасно використовуючи конфокальні маленькі отвори, є втрата сигналу.
4. Через обмеження дорогих надшвидких лазерів вартість багатофотонних скануючих мікроскопів відносно висока.
