Переваги вдосконаленої лазерної скануючої багатофотонної мікроскопії
Лазерна скануюча багатофотонна мікроскопія є основним удосконаленням оптичної мікроскопії, головним чином для спостереження глибокої структури живих клітин, фіксованих клітин і тканин, і може отримати чіткі та чіткі багатошарові Z-площинні структури, тобто оптичні зрізи, і може конструювати Тривимірна суцільна структура зразка. Конфокальний мікроскоп використовує лазерне джерело світла, яке розширюється, щоб заповнити всю задню фокальну площину лінзи об’єктива, а потім збирається в дуже малу точку на фокальній площині зразка через систему лінз об’єктива. Залежно від числової апертури лінзи об’єктива діаметр найяскравішої точки освітлення становить близько 0.25 ~ 0.8 мкм, а глибина — приблизно 0.5 ~ 1.5 мкм. Розмір конфокальної плями залежить від конструкції мікроскопа, довжини хвилі лазера, характеристик лінзи об’єктива, налаштування стану скануючого блоку та природи зразка. Польові мікроскопи мають великий діапазон і глибину освітлення, тоді як конфокальні мікроскопи мають освітлення, сконцентроване в фокальній точці на фокальній площині. Основна перевага конфокальної мікроскопії полягає в тому, що вона може виконувати тонкий оптичний розріз товстих флуоресцентних зразків (до 5 0 мкм або більше) товщиною приблизно від 0,5 до 1,5 мкм. Серію зображень оптичного розрізу можна отримати, переміщуючи зразок вгору та вниз за допомогою крокового двигуна мікроскопа по осі Z. Отримання інформації про зображення контролюється в межах точної площини, і йому не заважатимуть сигнали з інших місць на зразку. Після усунення ефекту фонової флуоресценції та збільшення співвідношення сигнал/шум контраст і роздільна здатність конфокальних зображень значно покращуються порівняно з традиційними флуоресцентними зображеннями з польовим освітленням. У багатьох зразках багато складних структурних компонентів переплітаються, утворюючи складні системи, але як тільки вдасться зібрати достатню кількість оптичних секцій, ми зможемо реконструювати їх у 3D за допомогою програмного забезпечення. Цей експериментальний підхід широко використовувався в біологічних дослідженнях для з’ясування складних структурних і функціональних зв’язків між клітинами або тканинами.
