Покращені переваги лазерних скануючих багатофотонних мікроскопів
Лазерний скануючий багатофотонний мікроскоп є значним удосконаленням оптичної мікроскопії, що головним чином проявляється у здатності спостерігати глибокі структури живих клітин, фіксованих клітин і тканин, а також отримувати чіткі й чіткі багато-шарові Z-структури площини, а саме оптичні зрізи, які можна використовувати для побудови три-вимірних твердих структур зразків. У конфокальному мікроскопі використовується лазерне джерело світла, яке розширюється, щоб заповнити всю фокальну площину лінзи об’єктива, а потім збирається в дуже маленькі точки на фокальній площині зразка через систему лінз об’єктива. Відповідно до числової апертури лінзи об’єктива діаметр найяскравішої точки освітлення становить приблизно 0,25-0,8 мкм, а глибина — приблизно 0,5-1,5 мкм. Розмір конфокальної точки визначається конструкцією мікроскопа, довжиною хвилі лазера, характеристиками об’єктива, параметрами стану скануючого блоку та властивостями зразка. Діапазон освітлення і глибина різкості мікроскопа великі, тоді як освітлення конфокального мікроскопа фокусується на фокальній точці на фокальній площині. Основна перевага конфокальної мікроскопії полягає в тому, що вона може виконувати тонкий оптичний зріз на товстих флуоресцентних зразках (до 50 мкм або більше) товщиною приблизно від 0,5 до 1,5 мкм. Серію зображень оптичних зрізів можна отримати, переміщуючи зразок угору та вниз за допомогою крокового двигуна мікроскопа по осі Z-. Збір інформації про зображення контролюється в площині * * без перешкод від сигналів, випромінюваних з інших місць на зразку. Після усунення впливу фонової флуоресценції та збільшення співвідношення сигнал/шум контраст і роздільна здатність конфокальних зображень значно покращуються порівняно з традиційними флуоресцентними зображеннями з польовим освітленням. У багатьох зразках складні структурні компоненти переплітаються, утворюючи складні системи, але як тільки вдається зібрати достатню кількість оптичних секцій, ми можемо використовувати програмне забезпечення для реконструкції їх у трьох вимірах. Цей експериментальний метод широко використовувався в біологічних дослідженнях для з’ясування складних структурних і функціональних зв’язків між клітинами або тканинами.
