Методи візуалізації для світлих і темних полів флуоресцентної мікроскопії
(1) Зображення в світлому полі (BFI), яке дозволяє лише пропущеним електронам у параксіальній області проходити через отвір об’єктива, утворюючи темне зображення на світлому фоні. Чим менша діафрагма лінзи об'єктива, тим більша контрастність світлопольного зображення; (2) Зображення в темному полі (DFI), яке дозволяє лише частині розсіяного променя під великим кутом або дифракційного променя кристала проходити через отвір лінзи об’єктива, блокуючи при цьому промінь, що проходить. Це створює яскраве графічне зображення на темному тлі. Цей метод зображення темного поля може покращити контрастність зображень і є важливим методом отримання зображень.
Існує приблизно чотири методи флуоресцентної мікроскопії для отримання зображення темного поля: (1) підтримання вертикального освітлення вздовж оптичної осі під час переміщення апертури об’єктива; (2) Використання похилого освітлення для отримання розсіяних променів у напрямку оптичної осі називається центральним зображенням темного поля (CDFI); (3) Діафрагма об’єктива з блокуванням центрального променя та круглою прозорою областю; (4) Використовуйте круглий прозорий прожектор для виявлення світла та діафрагму об’єктива з центральним круглим отвором. * Методи тут прості та зручні, але вони використовують електронне зображення в дальній області рукава, що призводить до великих аберацій і низької якості зображення. Другий метод дозволяє уникнути вищевказаних недоліків, але апертура об’єктива флуоресцентного мікроскопа Leica отримує лише невелику частину розсіяних дифрагованих електронів, що призводить до нижчої ефективності. Збоку діафрагми часто бомбардується велика кількість електронів, що може легко спричинити асиметричне забруднення та вплинути на якість зображення. У цьому відношенні було вдосконалено круглий об’єктив, але недоліком є те, що його важко виготовити та важко досягти повної осьової симетрії. Враховуючи відносно пом’якшені вимоги до системи освітлення, можна прийняти останнє рішення, яке передбачає додавання круглої апертури на конденсорі для забезпечення порожнистого освітлення зразка. Дія цього приладу. Його роздільна здатність зображення може бути близькою до роздільної здатності зображень зі світлим полем, тоді як контрастність значно покращена.
