Як правильно вибрати флуоресцентний мікроскоп
Флуоресцентний мікроскоп є стандартним мікроскопічним обладнанням для лабораторій і відділень патології. Він використовує характеристики флуоресценції для спостереження та візуалізації. Він широко використовується в клітинній біології, нейробіології, ботаніці, мікробіології, патології, генетиці та інших областях. Флуоресцентне зображення має такі переваги, як висока чутливість і висока специфічність, і дуже підходить для спостереження за розподілом специфічних білків і органоїдів у тканинах і клітинах, вивчення спільної локалізації та взаємодії, відстеження життєвих динамічних процесів, таких як зміни концентрації іонів. і т.д.
Вибір мікроскопа
Флуоресцентні мікроскопи в основному поділяються на три категорії: вертикальні флуоресцентні мікроскопи (придатні для розрізів), інвертовані флуоресцентні мікроскопи (підходять для живих клітин, враховуючи розрізи), стереоскопічні флуоресцентні мікроскопи (підходять для більших зразків, таких як рослини, рибки даніо (дорослі/ ембріон), медака, органи миші/щура тощо).
Вибір кубів флуоресцентного фільтра
Окрім врахування довжин хвиль збудження та випромінювання флуоресцентних зондів, при виборі блоків фільтрів також необхідно враховувати, чи існує неспецифічне збудження та перехресне забарвлення для багатоколірних мічених зразків. В експерименті ми спробуємо вибрати довжину хвилі, найближчу до піку збудження, а діапазон прийому повинен включати пік випромінювання. Наприклад, пік збудження Alexa Fluor 488 становить 500 нм, а фільтр збудження 480/40 можна вибрати у флуоресцентному мікроскопі. Флуоресцентні фільтрувальні куби, які зазвичай використовуються у флуоресцентних мікроскопах, можна розділити на два типи: довгопрохідні (LP для коротких) і смугові (BP для коротких), які також потрібно вибирати відповідно до потреб.
Вибір люмінесцентного джерела світла
В даний час зазвичай використовуються люмінесцентні джерела світла, включаючи ртутні лампи, металогалогенні лампи та світлодіодні джерела світла, які швидко розвиваються в останні роки. Спектр люмінесцентного джерела світла є безперервним і переривчастим, і енергія буде різною в різних діапазонах. Завдяки відносно вузькій спектральній смузі, більш стабільному виходу енергії, тривалому терміну служби, безпеці та захисту навколишнього середовища та багатьом іншим перевагам світлодіодне джерело світла поступово стає основним джерелом світла флуоресцентного мікроскопа.
конфокальний мікроскоп
У традиційному спостереженні за допомогою флуоресцентного мікроскопа через накладання флуоресцентних маркерних речовин і автофлуоресцентних структур вони тісно поєднані, тоді як об’єктив традиційного епіфлуоресцентного мікроскопа не тільки збирає світло з фокальної площини, але також збирає розсіяне світло над і під фокальною площиною. фокальній площині, що призводить до значного зниження роздільної здатності та контрастності зображення.
Конфокальне зображення вирішує цю проблему, виявляючи лише частину світла, відбитого від фокальної площини. Джерело світла проходить через отвір, утворюючи маленьку тонку світлову пляму на фокальній площині. Світло, що випромінюється з фокальної площини, збирається лінзою об’єктива. Більша частина флуоресценції, що випромінюється з точки над або під фокальною площиною лінзи об’єктива, не може сходитися до маленького отвору. Лише флуоресценція, розташована у фокальній площині, і невелика частина позафокусної флуоресценції можуть проходити через отвір, тоді як промені світла поза фокальною площиною сходяться в передній або задній частині пластини-обскури й блокуються від входу в детектор через отвір. Виявлене зображення є зображенням у фокальній площині, тому якість кінцевого зображення значно покращується.
Завдяки перевагам і практичності функцій лазерного скануючого конфокального мікроскопа, конфокальний мікроскоп є незамінним експериментальним помічником у галузі високоточної клітинної біології, ботаніки та клітинних досліджень. Водночас у майбутньому науково-дослідницькому центрі це буде основний і основний інструмент наукового дослідження.
