Ви коли-небудь розуміли основні принципи фазово-контрастної мікроскопії?
Фазово-контрастний мікроскоп був винайдений голландським вченим Зерніке в 1935 році для спостереження за незабарвленими зразками. Для живих клітин і незабарвлених біологічних зразків, через різницю в показнику заломлення та товщині мікроструктури кожної частини клітини, коли світлова хвиля проходить через неї, довжина хвилі та амплітуда не змінюються, змінюється лише фаза (різниця амплітуд ), який невидимий для людського ока. спостерігати. Фазово-контрастний мікроскоп змінює різницю фаз і використовує явища дифракції світла та інтерференції, щоб змінити різницю фаз на різницю амплітуд для спостереження за живими клітинами та незабарвленими зразками. Відмінність фазово-контрастного мікроскопа від звичайного мікроскопа полягає в тому, що замість змінної діафрагми використовується кільцева діафрагма, замість звичайного об'єктива використовується об'єктив з фазовою пластиною, передбачений зорова труба для коаксіальності.
Основні принципи фазово-контрастної мікроскопії:
Використовуючи різницю показників заломлення та товщини між різними структурними компонентами об’єкта, різниця оптичного шляху, що проходить через різні частини об’єкта, перетворюється на різницю амплітуди (інтенсивності світла), а через збиральну лінзу з кільцевою діафрагмою та різниця фаз із фазовою пластиною Об’єктив реалізує оглядовий мікроскоп. Він в основному використовується для спостереження за живими клітинами або незабарвленими зрізами тканини, а іноді також може використовуватися для спостереження за пофарбованими зразками, які не мають контрасту.
Різниця оптичного шляху видимого світла, що проходить через зразок, змінюється на різницю амплітуд, тим самим покращуючи контраст між різними структурами та роблячи різні структури чітко видимими. Світло заломлюється після проходження через зразок, відхиляється від початкового оптичного шляху та затримується на 1/4λ (довжини хвилі). Якщо його збільшити або зменшити на 1/4λ, оптична різниця шляху стане 1/2λ, і два промені інтерферують після осі світла. Посилення, збільшення або зменшення амплітуди, покращення контрасту.
Фазово-контрастний мікроскоп має дві функції, яких немає в інших мікроскопів: ① він відділяє пряме світло (фонове світло в полі зору) від світла, дифрагованого об’єктом; ② він видаляє приблизно половину довжини хвилі з фази, щоб вона не могла взаємодіяти, що призводить до зміни інтенсивності.
