Технічні параметри флуоресцентної мікроскопії Техніки та методи флуоресцентної мікроскопії
Технічні параметри флуоресцентного мікроскопа 1. Ширококутний окуляр 2. Ахроматична лінза об’єктива 3. Конвертер об’єктива з чотирма отворами 4. Епіфлуоресцентний пристрій Синя (B) Зелена (G) система збудження 100 Вт ртутна лампа 5. Коаксіальний грубий і точний механізм регулювання фокуса: регулювання Діапазон фокусування: 15 мм Значення сітки мікропереміщення: 0,002 мм 6. Двошаровий механічний стіл Діапазон поздовжнього переміщення: 70 мм Діапазон бічного переміщення: 50 мм
Технічні параметри флуоресцентного мікроскопа
1. Ширококутний окуляр
2. Ахроматична лінза об'єктива
3. Наконечник з чотирма апертурами
4. Епіфлуоресцентний пристрій синій (B) зелений (G) система збудження 100 Вт ртутна лампа
5. Коаксіальний грубий і точний механізм регулювання фокуса: діапазон фокусування 15 мм, значення сітки тонкого переміщення 0.002 мм
6. Двошаровий механічний верстак
Діапазон вертикального переміщення: 70 мм Діапазон бічного переміщення: 50 мм
Навички та методи флуоресцентної мікроскопії
(1) Предметне скло
Товщина предметного скла має бути від 0,8 до 1,2 мм. Занадто товсте предметне скло, з одного боку, поглинає більше світла, а з іншого боку, збудливе світло не може бути сконцентровано на зразку. Предметні скла мають бути гладкими, однакової товщини та без явної автофлуоресценції. Іноді використовують предметні скла з кварцового скла.
(2) Покривне скло
Товщина покривного скла становить приблизно 0,17 мм, гладке. Для посилення збуджуючого світла також можна використовувати інтерференційне покривне скло, яке є спеціальним покривним склом, покритим декількома шарами речовин (наприклад, фториду магнію), які мають різну інтерференційну дію на світло різних довжин хвиль, що може призвести до флуоресценція йде гладко. Збуджувальне світло проходить і відбивається, і це відбите збудливе світло збуджує зразок.
(3) Зразок
Зрізи тканин або інші зразки не повинні бути надто товстими. Якщо він занадто товстий, більша частина збуджувального світла буде споживатися в нижній частині зразка, тоді як верхня частина, яка безпосередньо спостерігатиметься лінзою об’єктива, не збуджуватиметься повністю. Крім того, на судження впливають перекриття комірок або забруднення.
(4) Монтажний засіб
Гліцерин зазвичай використовується як кріпильний агент, який не повинен мати автофлуоресценції, безбарвний і прозорий, а яскравість флуоресценції яскравіша при рН 8.5-9.5, і його непросто швидко згаснути. Тому рівномірна суміш гліцерину та 0.5mol/l карбонатного буферного розчину з pH від 90 до 9,5 зазвичай використовується як кріпильний агент.
(5) дзеркальна олія
Як правило, під час спостереження за зразками за допомогою темнопольних флуоресцентних мікроскопів і масляних іммерсійних лінз необхідно використовувати іммерсійну олію. Найкраще використовувати спеціальне нефлуоресцентне іммерсійне масло. Замість цього також можна використовувати вищезазначений гліцерин і рідкий парафін, але показник заломлення низький, що незначно впливає на якість зображення. Вплив.
Принцип і конструктивні особливості люмінесцентного мікроскопа
Флуоресцентна мікроскопія використовує точку з високою ефективністю світла для випромінювання світла певної довжини хвилі (наприклад, ультрафіолетового світла 3650 дюймів або фіолетового синього світла 4200 дюймів) через систему фільтрів як збуджуючого світла для збудження флуоресцентних речовин у зразку для випромінювання флуоресценції. різні кольори. Після цього спостерігайте через збільшення лінзи об’єктива та окуляра. Таким чином, під сильним контрастним фоном, навіть якщо флуоресценція дуже слабка, його легко ідентифікувати та він має високу чутливість. В основному він використовується для дослідження структури та функції клітини та хімічного складу. Основна структура флуоресцентного мікроскопа складається зі звичайного оптичного мікроскопа та деяких аксесуарів (таких як флуоресцентне джерело світла, фільтр збудження, двоколірний світлорозділювач і блокуючий фільтр тощо). Флуоресцентне джерело світла — зазвичай використовують ртутну лампу надвисокого тиску (50-200 Вт), яка може випромінювати світло з різною довжиною хвилі, але кожна флуоресцентна речовина має довжину хвилі збудження, яка створює найсильнішу флуоресценцію, тому фільтр збудження (загалом, існують ультрафіолетові, фіолетові, сині та зелені фільтри збудження), які пропускають світло збудження лише певної довжини хвилі та опромінюють зразок, поглинаючи інше світло. Після того, як кожна речовина опромінюється збуджуючим світлом, вона випромінює видиму флуоресценцію з довшою довжиною хвилі, ніж довжина хвилі опромінення, за дуже короткий час. Флуоресценція є специфічною і зазвичай слабшою, ніж світло збудження. Щоб спостерігати специфічну флуоресценцію, необхідно додати блокування (або придушення) за лінзою об’єктива та використовувати разом із нею.
Відмінність флуоресцентного мікроскопа від звичайного мікроскопа
1. Спосіб освітлення зазвичай епіскопічний, тобто джерело світла проектується на зразок через об'єктив;
2. Джерелом світла є ультрафіолетове світло, довжина хвилі коротша, а роздільна здатність вища, ніж у звичайних мікроскопів;
3. Існує два спеціальні фільтри: один перед джерелом світла використовується для фільтрації видимого світла, а фільтр між окуляром і лінзою об’єктива використовується для фільтрації ультрафіолетових променів для захисту людського ока.
Флуоресцентний мікроскоп також є різновидом оптичного мікроскопа, основна відмінність полягає в тому, що довжина хвилі збудження у двох різна. Це визначає різницю між флуоресцентним мікроскопом і звичайним оптичним мікроскопом з точки зору конструкції та використання.
Флуоресцентна мікроскопія є важливим інструментом імунофлуоресцентної цитохімії. Він складається з основних компонентів, таких як джерело світла, система фільтрів та оптична система. Це використання певної довжини хвилі світла для збудження зразка для випромінювання флуоресценції та спостереження за флуоресцентним зображенням зразка шляхом посилення лінз об’єктива та системи окулярів.
