Основи роботи флуоресцентного мікроскопа
a. Вимкнути світло в кімнаті і включити ртутну лампу мікроскопа;
b. Виберіть відповідний фільтр відповідно до флуоресцеїну, позначеного зразком;
в. Помістіть зразок і знайдіть відповідне поле зору;
d. Якщо вам потрібно зробити знімки, переконайтеся, що в камері встановлена кольорова плівка;
д. Увімкніть пристрій для селфі, виберіть ручне перемикання, зазвичай швидкість зйомки становить 0.5-10 секунд;
f. Після використання вимкніть усе живлення та запишіть використання. в
в
3. Спосіб реєстрації флуоресцентного зображення
Флуоресцентне зображення, яке бачить флуоресцентний мікроскоп, має як морфологічні характеристики, так і колір і яскравість флуоресценції. Оцінюючи результати, ці два параметри необхідно об’єднати для повного оцінювання. Результати фіксують за суб'єктивними показниками, тобто візуальним спостереженням працівників. Як загальне якісне спостереження, в основному надійне. З розвитком технологій і науки об’єктивні індикатори використовуються для запису результатів судження різною мірою, такі як клітинні спектрофотометри, аналізатори зображень та інші прилади. Однак результати, зафіксовані цими інструментами, також повинні поєднуватися з суб’єктивними судженнями. в
Флуоресцентна мікроскопічна фотографія дуже необхідна для запису флуоресцентних зображень. Оскільки флуоресценцію легко згаснути та послабити, необхідно записувати результати в режимі реального часу. Метод в основному такий самий, як і звичайна мікрофотографія. Просто потрібно використовувати високошвидкісну фоточутливу плівку. Оскільки ультрафіолетове світло сильно впливає на гасіння флуоресценції, наприклад маркери FITC, яскравість флуоресценції зменшиться на 50 відсотків під час опромінення ультрафіолетовим світлом протягом 30 секунд. Таким чином, якщо швидкість експозиції надто низька, флуоресцентне зображення не вийде. Загальні дослідницькі флуоресцентні мікроскопи мають напівавтоматичні або повністю автоматичні системи мікрофотографії. в
в
4. Застереження щодо використання флуоресцентної мікроскопії
a. Працюйте суворо відповідно до вимог заводських інструкцій флуоресцентного мікроскопа та не змінюйте програму за бажанням. в
b. Огляд необхідно проводити в темному приміщенні. Увійшовши в темну кімнату, підключіть джерело живлення та запаліть ртутну лампу надвисокого тиску на 5-15 хвилин. Коли яскраве світло від джерела світла стає стабільним, очі повністю адаптуються до темної кімнати, а потім починають спостерігати за зразком. в
в. Щоб запобігти пошкодженню очей ультрафіолетовими променями, під час регулювання джерела світла надягайте захисні окуляри. в
d. Бажано, щоб кожен раз перевірка тривала 1-2 годин. Якщо він перевищує 90 хвилин, інтенсивність світла ртутної лампи надвисокого тиску поступово зменшуватиметься, а флуоресценція слабшатиме; після опромінення зразка ультрафіолетовим світлом протягом 3-5 хвилин флуоресценція також значно послабиться; тому він не повинен перевищувати щонайбільше 2-3 годин. . в
д. Термін служби джерела світла флуоресцентного мікроскопа обмежений, тому зразки слід перевіряти централізовано, щоб заощадити час і захистити джерело світла. Коли погода спекотна, слід додати вентилятори для розсіювання тепла, а нові лампочки слід реєструвати з початку їх використання. Якщо ви хочете використовувати її знову після того, як лампа погасла, ви повинні зачекати, поки лампочка достатньо охолоне, перш ніж запалити її. Уникайте запалювання джерела світла кілька разів на день. в
f. Спостерігайте за зразком одразу після фарбування, оскільки з часом флуоресценція поступово слабшає. Якщо зразок зберігається в поліетиленовому поліетиленовому пакеті при 4 градусах, час ослаблення флуоресценції може бути відстрочений і можна запобігти випаровуванню кріпильного агента. в
g. Оцінювальний стандарт яскравості флуоресценції: зазвичай він поділяється на чотири рівні, тобто «-» означає, що флуоресценція відсутня або слабка. «плюс» означає, що було видно лише чітко видиму флуоресценцію. «плюс плюс» означає, що видно яскраву флуоресценцію. «плюс плюс плюс» означає видиму яскраву флуоресценцію.
