Експериментальні принципи мікробної мікроскопії методом прямого підрахунку
Прямий підрахунок під мікроскопом за допомогою гемоцитометра є широко використовуваним методом підрахунку мікроорганізмів. Перевага цього методу в тому, що він інтуїтивно зрозумілий і швидкий. Помістіть належним чином розведену бактеріальну суспензію (або суспензію спор) у лічильну камеру між предметним та покривним скельцями гемоцитометра та підрахуйте під мікроскопом. Оскільки об’єм лічильної камери фіксований (0,1 мм2), його можна перетворити на загальну кількість мікроорганізмів на одиницю об’єму на основі кількості мікроорганізмів, які спостерігаються під мікроскопом. Оскільки цей метод підраховує загальну кількість живих і мертвих бактерій, його також називають методом загального підрахунку бактерій.
Гемоцитометр зазвичай являє собою спеціальне предметне скло з чотирма прорізами, які утворюють три платформи. Середня площадка розділена на дві половини короткою горизонтальною канавкою. На платформі з кожного боку вигравірувана квадратна сітка. Кожна квадратна сітка поділена на дев'ять великих квадратів. Велика площа посередині — це зал для підрахунку голосів. Підрахунок мікроорганізмів відбувається в лічильній камері. Структуру гемоцитометра показано на малюнку Ⅷ-1.
Шкала лічильної камери зазвичай має дві характеристики. Один — це великий квадрат, поділений на 16 середніх квадратів, а кожен середній квадрат поділений на 25 малих квадратів (Малюнок Ⅷ-2); інший — великий квадрат. Квадратну сітку поділено на 25 середніх квадратів, а кожен середній квадрат поділено на 16 малих квадратів (рис. VIII-1, C). Але незалежно від того, яка це дошка для підрахунку, кількість малих квадратів у кожному великому квадраті однакова, тобто 16×25=400 малих квадратів, як показано на малюнку Ⅷ-2.
Довжина сторони кожного великого квадрата дорівнює 1 мм, отже, площа кожного великого квадрата дорівнює 1 мм2. Після того, як покривне скло закрито, висота між предметним склом і покривним склом становить 0.1 мм, отже об’єм лічильної камери становить 0.1 мм3.
Під час підрахунку зазвичай підраховують загальну кількість бактерій у п’яти середніх квадратах, потім знаходять середнє значення кожного середнього квадрата, а потім множать на 16 або 25, щоб отримати загальну кількість бактерій у великому квадраті, а потім обчислюють. Перетворити на загальна кількість бактерій в 1 мл розчину бактерій.
