Покращення переваг багатофотонної лазерної скануючої мікроскопії
Лазерна скануюча багатофотонна мікроскопія є великим удосконаленням у порівнянні з оптичною мікроскопією. Він може спостерігати глибоку структуру живих клітин, фіксованих клітин і тканин, а також може отримати чіткі та чіткі багатошарові Z-площинні структури, тобто оптичні зрізи, з яких він може побудувати тривимірну тверду структуру зразка. Конфокальна мікроскопія використовує лазерне джерело світла, яке після розширення заповнює всю задню фокальну площину лінзи об’єктива, а потім проходить через систему лінз об’єктива, щоб сходитися в дуже малу точку на фокальній площині зразка. Залежно від числової апертури лінзи об’єктива діаметр найяскравішої плями освітлення становить близько 0.25 ~ 0.8 мкм, а глибина — приблизно 0.5 ~ 1.5 мкм . Розмір конфокальної плями залежить від конструкції мікроскопа, довжини хвилі лазера, характеристик лінзи об’єктива, параметрів стану скануючого пристрою та властивостей зразка. Діапазон освітлення і глибина освітлення польового мікроскопа великі, тоді як освітленість конфокального мікроскопа зосереджена на точному фокусуванні на фокальній площині. Основна перевага конфокальної мікроскопії полягає в тому, що вона може виконувати тонкий оптичний розріз товстих флуоресцентних зразків (які можуть досягати 50 мкм або більше), а товщина зрізів становить приблизно від 0,5 до 1,5 мкм. Послідовні зображення оптичних розрізів можна отримати, переміщуючи зразок вгору та вниз за допомогою складного крокового двигуна осі Z мікроскопа. Збір інформації про зображення контролюється в точній площині без впливу сигналів, що випромінюються з інших місць на зразку. Після усунення впливу фонової флуоресценції та збільшення співвідношення сигнал/шум контраст і роздільна здатність конфокальних зображень значно покращуються порівняно з традиційними флуоресцентними зображеннями з польовим освітленням. У багатьох зразках багато складних структурних компонентів переплітаються, утворюючи складні системи, але як тільки вдається зібрати достатню кількість оптичних секцій, ми можемо реконструювати їх у трьох вимірах за допомогою програмного забезпечення. Цей експериментальний метод широко використовувався в біологічних дослідженнях для з’ясування складних структурних і функціональних зв’язків між клітинами або тканинами.
