Визначення чисельності мікроорганізмів-Мікроскопічний метод прямого підрахунку!
Зростання бактеріальної популяції проявляється збільшенням кількості клітин або збільшенням клітинного матеріалу. Методи визначення кількості клітин включають прямий мікроскопічний підрахунок, підрахунок на чашках, оцінку каламутності за допомогою спектрофотометра, найвірогіднішу кількість MPN і мембранну фільтрацію. (мембранна фільтрація) тощо. Методи вимірювання клітинної речовини включають визначення сухої маси клітини, визначення певних компонентів клітини, таких як вміст азоту, вміст РНК і ДНК, а також визначення продуктів метаболіту. Коротше кажучи, існує багато методів вимірювання росту мікроорганізмів, кожен із яких має свої переваги та недоліки. Метод слід вибирати відповідно до конкретних вимог роботи. Цей експеримент в основному впроваджує метод прямого підрахунку під мікроскопом, який зазвичай використовується у виробництві та науково-дослідній роботі.
1. Вимоги до призначення
1. З’ясуйте принцип підрахунку клітин крові за допомогою лічильної дошки.
2. Оволодіти методикою підрахунку мікроорганізмів за допомогою дошки для підрахунку клітин крові.
2. Основні принципи
Метод прямого підрахунку під мікроскопом – це простий, швидкий та інтуїтивно зрозумілий метод, який поміщає невелику кількість суспензії зразка, який потрібно перевірити, на спеціальне предметне скло з визначеною площею та об’ємом (також називається бактеріометром) і підраховує його безпосередньо під мікроскопом. методи. В даний час широко використовувані бактеріометри в країні та за кордоном включають: гемоцитометр, бактеріометр Петероффа-Хаузера, бактеріометр Хокслі тощо. Усі вони можуть використовуватися для підрахунку дріжджів, бактерій, спор цвілі та інших суспензій, і основні принципи однакові. Останні два лічильники бактерій мають загальний об’єм 0.02 мм3 після покриття покривним склом, а відстань між покривним склом і предметним склом становить лише 0,02 мм. Таким чином, об’єктив з масляною іммерсією можна використовувати для спостереження та виявлення менших клітин, таких як бактерії. рахувати. На додаток до використання цих бактеріометрів існує також метод оцінки, який безпосередньо спостерігає співвідношення площі мазка до площі поля зору під мікроскопом. Цей метод зазвичай використовують для бактеріологічного дослідження молока. Переваги методу прямого підрахунку під мікроскопом полягають у тому, що він інтуїтивно зрозумілий, швидкий і простий у використанні. Однак недоліком цього методу є те, що виміряний результат зазвичай є сумою мертвих і живих бактерій. В даний час існує кілька методів подолання цього недоліку, наприклад комбінування мікрокамерної культури з фарбуванням життєздатних бактерій (короткий час) і додавання інгібіторів поділу клітин для досягнення мети підрахунку лише життєздатних бактерій.
У цьому експерименті використовується гемоцитометр як приклад для проведення прямого підрахунку під мікроскопом. Для використання двох інших бактеріометрів, будь ласка, зверніться до інструкцій кожного виробника. Прямий підрахунок під мікроскопом за допомогою гемоцитометра є широко використовуваним методом мікробного підрахунку. Рахункова дошка являє собою спеціальну гірку з чотирма пазами, що утворюють три майданчики; ширша платформа посередині розділена на дві половини короткою горизонтальною канавкою, а з кожного боку платформи є сітка. Кожна квадратна сітка поділена на дев'ять великих квадратів, і великий квадрат посередині є кімнатою для підрахунку. Структура дошки для підрахунку клітин крові показана на малюнку {{0}}. Загалом існує дві специфікації шкали лічильної камери. Один — це великий квадрат, поділений на 25 середніх квадратів, а кожен середній квадрат поділений на 16 малих квадратів (Малюнок 15-2); інший — великий квадрат. Квадратну сітку поділено на 16 середніх квадратів, а кожен середній квадрат поділено на 25 малих квадратів. Однак, незалежно від того, яка це дошка для підрахунку, у кожному великому квадраті є 400 маленьких квадратів. Довжина сторони кожного великого квадрата дорівнює lmm, тоді площа кожного великого квадрата дорівнює lmm2. Після того, як покривне скло закрито, висота між покривним скельцем і предметним склом становить 0,1 мм, тому об’єм лічильної камери становить 0,1 мм3 (одна десятитисячна мілілітра). Рисунок 15-1 Структура панелі для підрахунку клітин крові (1) Рисунок 15-2 Структура панелі для підрахунку клітин крові (2) A. Вигляд спереду; B. Поздовжній розріз; збільшена квадратна сітка, великий квадрат посередині є лічильною камерою 1. Лічильна дошка клітин крові; 2. Покривне скло; 3. Під час підрахунку в лічильній камері зазвичай підраховують загальну кількість бактерій у п’яти квадратах, потім знаходять середнє значення кожного квадрата, а потім множать на 25 або 16, щоб отримати загальну кількість бактерій у великому квадраті. на загальну кількість бактерій в 1 мл розчину бактерій. Припустимо, що загальна кількість бактерій у п’яти середніх квадратах дорівнює A, а коефіцієнт розведення бактеріального розчину – B. Якщо це лічильна пластина з 25 середніми квадратами, то загальна кількість бактерій в 1 мл розчину бактерій {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (штуки) Таким же чином, якщо це лічильна пластина з 16 квадратами, загальна кількість бактерій в 1 мл розчину бактерій {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (шт.),,
