Визначення кількості мікроорганізмів - мікроскопічний метод прямого підрахунку!
Фундаментальний
Мікроскопічний метод прямого підрахунку – це простий, швидкий та інтуїтивно зрозумілий метод розміщення невеликої кількості суспензії зразка, який потрібно перевірити, на спеціальне предметне скло (також відоме як лічильник бактерій) з певною площею та об’ємом і підрахунок безпосередньо під мікроскоп. В даний час лічильники бактерій, які зазвичай використовуються в країні та за кордоном, включають: дошку для підрахунку клітин крові, лічильник бактерій Peteroff-Hauser і лічильник бактерій Hawksley тощо. Усі вони можуть використовуватися для підрахунку суспензій, таких як дріжджі, бактерії та спори цвілі, і основні принципи однакові. Останні два лічильники бактерій мають загальний об’єм 0.02 мм3 після покриття покривним склом, а відстань між покривним склом і предметним склом становить лише 0,02 мм, тому дрібні клітини, такі як Бактерії можна спостерігати та підраховувати за допомогою масляної імерсійної лінзи. На додаток до використання цих лічильників бактерій існує також метод оцінки безпосереднього спостереження за співвідношенням площі мазка до площі поля зору під мікроскопом. Цей метод зазвичай використовують для бактеріологічного дослідження молока. Перевага методу прямого підрахунку під мікроскопом полягає в тому, що він інтуїтивно зрозумілий, швидкий і простий у використанні. Але недоліком цього методу є те, що виміряні результати зазвичай є сумою мертвих і живих бактерій. В даний час існують деякі методи подолання цього недоліку, наприклад комбінування мікрокамерної культури з фарбуванням живих бактерій (короткий час) і додавання інгібіторів поділу клітин для досягнення мети підрахунку лише живих бактерій.
У цьому експерименті гемоцитометр використовувався як приклад для прямого підрахунку під мікроскопом. Методи використання двох інших лічильників бактерій дивіться в інструкціях кожного виробника. Прямий підрахунок під мікроскопом за допомогою гемоцитометра є широко використовуваним методом мікробного підрахунку. Рахункова дошка — це спеціально виготовлене предметне скло, на якому чотири прорізи утворюють три майданчики; ширша платформа посередині розділена на дві половини коротким горизонтальним прорізом, а кожна сторона платформи вистелена сіткою. Кожна сітка поділена на дев'ять великих квадратів, а середній великий квадрат є лічильною камерою. Масштаб лічильної кімнати зазвичай має дві характеристики: одна полягає в тому, що великий квадрат ділиться на 25 середніх квадратів, а кожен середній квадрат ділиться на 16 малих квадратів; інший полягає в тому, що великий квадрат ділиться на 16 середніх квадратів, а кожен середній квадрат ділиться на 25 малих квадратів, але незалежно від того, яка дошка для підрахунку, є 400 малих квадратів кожен великий квадрат. Довжина сторони кожного великого квадрата дорівнює 1 мм, а площа кожного великого квадрата дорівнює 1 мм 2. Після того, як покривне скло накрите, висота між покривним склом і предметним склом становить 0,1 мм, тому об’єм лічильна камера становить 0,1 мм (одну десятитисячну мілілітра).
