Порівняння конфокального мікроскопа і звичайного оптичного мікроскопа
Мікроскоп є основним інструментом для спостереження за клітинами. Залежно від джерела світла його можна розділити на дві категорії: оптичний мікроскоп і електронний мікроскоп. Перший використовує видиме світло (від ультрафіолетового мікроскопа до ультрафіолетового світла) як джерело світла, а другий використовує електронний промінь як джерело світла. Звичайний оптичний мікроскоп і лазерний конфокальний мікроскоп належать до одного оптичного мікроскопа.
I. Загальний оптичний мікроскоп
Звичайний біологічний мікроскоп складається з трьох частин, а саме: ① система освітлення, включаючи джерело світла та конденсор; ② система оптичного збільшення, що складається з об’єктивів і окулярів, є основним корпусом мікроскопа, щоб усунути сферичну та хроматичну аберації, окуляри та об’єктиви складаються зі складної групи лінз; ③ механічний пристрій, який використовується для фіксації матеріалу та спостереження за зручністю.
Об'єкт мікроскопа чіткий не тільки визначається збільшенням, але й роздільною здатністю мікроскопа (роздільною здатністю), роздільна здатність відноситься до мікроскопа (або людського ока від мішені 25 см) може розрізнити об'єкт з невеликими інтервалами здатності до Розрізняти розмір роздільної здатності визначається довжиною хвилі світла і швидкістю обертання дзеркала, а також показником заломлення середовища, вираженим у формулі:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 де: n=показник заломлення середовища;=кут рота дзеркала (зразок на роті об’єктива кута натягу), NA=швидкість рота дзеркала (числова апертура). Кут горловини дзеркала завжди має бути меншим за 180°, тому значення zui sina/2 обов’язково менше за 1.
Показник заломлення скла, що використовується у виробництві оптичних лінз, становить 1,65 ~ 1,78, показник заломлення середовища, що використовується, чим ближче до скла, тим краще. Для сухої лінзи об’єктива середовище для повітря, швидкість дзеркала зазвичай становить 0.05 ~ 0,95; масляні лінзи з кедровою олією як середовищем, швидкість дзеркала рота може бути близькою до 1,5.
Звичайна довжина світлової хвилі 400~700 нм, тому значення роздільної здатності мікроскопа буде не менше ніж 0,2 мкм, роздільна здатність людського ока становить 0,2 мм, тому загальна конструкція мікроскопа має збільшення збільшення зазвичай становить 1000X.
По-друге, лазерний конфокальний скануючий мікроскоп
Лазерний конфокальний скануючий мікроскоп (лазерний конфокальний скануючий мікроскоп), з лазером як скануючим джерелом світла, точка за точкою, лінія за лінією, поверхня за поверхнею швидке сканування зображень, скануючий лазер і флуоресцентна колекція загального об’єктива, скануюча лазерна точка фокусування об’єктива , а й миттєве зображення точки об’єкта. Завдяки меншій довжині хвилі лазерного променя, промінь дуже тонкий, тому конфокальний лазерний скануючий мікроскоп має високу роздільну здатність, яка приблизно в 3 рази перевищує роздільну здатність звичайного оптичного мікроскопа. Система фокусується один раз, і сканування обмежується однією площиною зразка. Коли глибина фокусування не однакова, можна отримати зображення різних рівнів глибини зразка, і ця інформація про зображення зберігається в комп’ютері, завдяки комп’ютерному аналізу та моделюванню, вона може показати тривимірну структуру зразка клітини. .
