Порівняння між конфокальною мікроскопією та традиційною оптичною мікроскопією
Мікроскоп є основним інструментом для спостереження за клітинами. За різними джерелами світла їх можна розділити на дві категорії: оптичні мікроскопи та електронні мікроскопи. Перший використовує видиме світло (ультрафіолетовий мікроскоп використовує ультрафіолетове світло) як джерело світла, а другий використовує електронний промінь як джерело світла. До оптичних мікроскопів належать як звичайні оптичні мікроскопи, так і лазерні конфокальні мікроскопи.
Звичайний оптичний мікроскоп
Звичайний біологічний мікроскоп складається з трьох частин, а саме: ① система освітлення, включаючи джерело світла та конденсор; ② Система оптичного підсилення, що складається з об’єктива й окуляра, є основним корпусом мікроскопа. Щоб усунути сферичну та хроматичну аберацію, окуляр і об’єктив складаються зі складних груп лінз. Механічний пристрій використовується для фіксації матеріалів і полегшення спостереження.
Чіткість зображення мікроскопа залежить не тільки від його збільшення, а й від роздільної здатності. Роздільна здатність означає здатність мікроскопа (або людського ока на відстані 25 см від об’єкта) розрізняти об’єкти з малими інтервалами. Величина роздільної здатності залежить від довжини світлової хвилі, показника апертури та показника заломлення середовища. Він виражається як: R=0.61 λ/NANA=nsin /2, де n=показник заломлення середовища; =кут апертури (кут, під яким зразок відкриває апертуру лінзи об’єктива), NA=числова апертура. Чи кут дзеркала завжди менший за 180?, тому максимальне значення zui для sina/2 має бути меншим за 1.
Показник заломлення скла, яке використовується у виробництві оптичних лінз, становить 1.65-1.78, і чим ближчий показник заломлення середовища, що використовується, до показника скла, тим краще. Для сухих лінз об’єктива середовищем є повітря, а світлосила зазвичай становить 0.05-0.95; Масляний об’єктив використовує кедрову олію як середовище, а світлосила може бути близькою до 1,5.
Довжина хвилі звичайного світла становить {{0}} нм, тому значення роздільної здатності мікроскопа буде не менше 0,2 мкм, а роздільна здатність людського ока — 0,2 мм. Тому максимальне збільшення для конструкції мікроскопа зазвичай становить 1000 разів.
