Біомікроскопія щодо об'єму тканинних блоків
Біологічна мікроскопія Поки що холодна фіксація, заморожені ультратонкі зрізи та сублімаційна сушка є звичайними методами рентгенівських мікрозрізів тканин і клітин. Подробиці цього методу пояснюються наступним чином:
Для біологічних мікроскопів із конденсором конденсор можна переміщувати вгору та вниз, щоб зробити яскравість помірною, а також можна змінити діафрагму змінного світла, щоб досягти помірної яскравості 9b. Якщо світло сонячне, конденсор можна підняти відповідним чином, а апертуру джерела змінного світла можна відповідно збільшити. Якщо світло надто сильне, збиральну лінзу можна відповідно опустити, а діафрагму пересічного світла можна відповідно зменшити. Якщо в цьому випадку ви все ще почуваєтеся сліпуче, ви можете вибрати відповідний фільтр і встановити його на кронштейн під конденсатором. Цей дуб зможе отримати яскравість, яка вас задовольняє. Звичайно, регулювання верхнього та нижнього положень конденсора, налаштування розміру апертури змінного оптичного зчитування та вибір відповідного фільтра потребує певного періоду практики, щоб отримати досвід.
Дуже важливим питанням у біологічній мікроскопії є те, що в процесі відбору зразків і розділення клітин, після ліофільної сушки та заливання смоли (FD), після заморожування ультратонких агрегатів і після ліофільної сушки вміст 65 елементів у кожній частині необхідно обережно поводитися. Клітини, що підлягають аналізу, не можуть бути пошкоджені. Тому що рентгенівський мікроаналіз не тільки включає багато етапів, але й коштує багато. Якщо проаналізовані клітини є пошкодженими або мертвими клітинами після тривалого часу та багатоетапної обробки, дуже прикро робити неправильні висновки. Наприклад, кардіоміоцити, розділені обробкою колагеназою, мають дві форми, одна з яких є довгострижневою
Біомікроскопія Кількість і розподіл електролітів у цих двох типах клітин досить різні. Na у циркулярних кардіоміоцитах дуже високий, а K дуже низький, а в нематодах концентрація ca дуже висока. Після перевірки за допомогою інших методів аналізу було доведено, що високий Na і низький K круглих клітин і високий Ca в мітохондріях зумовлені пошкодженням клітинної мембрани під час процесу поділу клітин. Метод крижаної фіксації клітин і тканин зазвичай полягає в тому, щоб спочатку застосувати гасіння та фіксацію, а потім зберігати їх у рідкому азоті. Для ефекту консервації дуже важлива гартівна фіксація. Живі клітини або свіжі тканини багаті водою. Під час гасіння частини клітин або тканин, які знаходяться в прямому контакті з подрібненим холодоагентом (особливо під час гасіння рідким азотом), часто спочатку заморожують і фіксують, таким чином утворюючи «оболонку», яка перешкоджає центральним частинам клітин. подрібнений і холодно закріплений. Тому під час аналізу мікрообластей X-line часто виявляється, що в центрі більших комірок є кристали льоду. Щоб цього не сталося, речовина з температурою плавлення, вищою, ніж у рідкого азоту, але нижчою, ніж у 806c, використовується як розбитий холодоагент. Таких речовин багато, але найпростішим для отримання, найдешевшим є концентрований пропан (температура кипіння - 42.120c, температура плавлення - 187.10c, молекулярна маса 44,1), а швидкість охолодження найшвидша . Але його недолік в тому, що він горючий.
Біологічний мікроскоп може поставити м’язове волокно на спеціальну стійку, так що, коли скорочення м’язового волокна досягає певної фази та потребує фіксації, негайно запустіть насадку для розпилення рідкого пропану на м’язове волокно, щоб погасити та зафіксувати його. Потім м'язові волокна разом з каркасом виймали і поміщали в рідкий азот. Якщо ви фіксуєте клітини крові або ізольовані клітини, спочатку сконцентруйте клітини центрифугуванням на низькій швидкості, перемістіть клітини у срібний флакон з хорошою теплопровідністю, помістіть флакон у рідкий пропан і заморозьте для фіксації. Під час фіксації підшлункової залози щура в лабораторії Холла два сталеві блоки були попередньо охолоджені рідким гелієм (або рідким азотом), а два мідні блоки були затиснуті щипцями та розміщені на передній і задній частині підшлункової залози, щоб загартувати та зафіксувати підшлункова залоза. Тканини або клітини можна зберігати в рідкому азоті для тривалого зберігання після гартування та фіксації.
Біологічна мікроскопія На додаток до найбільш шанованого на даний момент методу заморожених ультратонких зрізів, ось ще один метод осадження, який використовують вчені. Речовина додається для утворення осаду з компонентом, який аналізується, щоб знерухомити його перед аналізом, а потім аналізується осад. Наприклад, люди часто використовують оксалат і піроантимонат для відкладення кальцію в м'язових клітинах. Перший недостатньо чутливий до низької концентрації Са в цитоплазмі; піроантимонат є більш чутливим і може утворювати електронно-щільні відкладення з вільним кальцієм у мозку, але піроантимонат несумісний з натрієм, марганцем, барієм, залізом. Відкладення також утворюються і є менш специфічними. Процес підготовки зразків подібний до підготовки ультратонких зрізів звичайних трансмісійних електронних мікроскопів, відмінність полягає в тому, що 3-відсотковий піроантимонат калію (фосфатний буферний розчин, pH 7,6) фіксували протягом 6 годин перед фіксацією, а на пофарбованих ультратонких зрізах м’язів, На середніх лініях смуг A і 2 кожного саркомера було видно чорні відкладення, а для рентгенівського мікроаналізу використовували незабарвлені зрізи. Діамінобензидину тетрагідрохлорид (ДАБ) використовували для осадження гемвмісних речовин тощо. Поєднання реакції гістохімічної преципітації та рентгенівського мікродиференціального містка можна розглядати в лабораторіях, які не мають заморожених ультратонких зрізів. Напівкількісний аналіз може бути виконаний відповідно до висоти піку елементів, що аналізуються
