Застосування та використання принципів флуоресцентного мікроскопа
Принципи та структурні характеристики флуоресцентних мікроскопів. Флуоресцентні мікроскопи використовують точкове джерело світла з високою ефективністю світла для випромінювання світла певної довжини хвилі (наприклад, ультрафіолетове світло 3650 дюймів або пурпурно-синє світло 4200 дюймів) через систему кольорових фільтрів як світло збудження для збуджують флуоресценцію в зразку. Після того, як речовина випромінює флуоресценцію різних кольорів, її потім спостерігають за допомогою збільшення лінзи об’єктива та окуляра. Таким чином, під сильним контрастним фоном, навіть якщо флуоресценція дуже слабка, його легко ідентифікувати та він має високу чутливість. В основному він використовується для вивчення структури та функції клітин, а також хімічного складу. Основна структура флуоресцентного мікроскопа складається зі звичайного оптичного мікроскопа та деяких аксесуарів (таких як джерело флуоресцентного світла, фільтр збудження, двоколірний світлорозділювач, блокуючий фільтр тощо). Флуоресцентне джерело світла – зазвичай використовує ртутну лампу надвисокого тиску (від 50 до 200 Вт), яка може випромінювати світло з різною довжиною хвилі, але кожна флуоресцентна речовина має довжину хвилі збудження, яка створює найсильнішу флуоресценцію, тому фільтр збудження (загалом існують ультрафіолетовий, фіолетовий, синій і зелений фільтри збудження), які пропускають світло збудження лише певної довжини хвилі та освітлюють зразок, поглинаючи при цьому все інше світло. Після того, як кожна речовина опромінюється збуджуючим світлом, вона випромінює видиму флуоресценцію з довшою довжиною хвилі, ніж довжина хвилі опромінення, за дуже короткий час. Флуоресценція специфічна і, як правило, слабша, ніж світло збудження. Для спостереження специфічної флуоресценції необхідний блокуючий (або пригнічуючий) фільтр за лінзою об’єктива. Він виконує дві функції: одна полягає в поглинанні та блокуванні збуджуючого світла від потрапляння в окуляр, щоб уникнути порушення флуоресценції та пошкодження очей; інший – вибрати та дозволити певній флуоресценції пройти, щоб показати певний колір флуоресценції. Два фільтри потрібно вибрати та використовувати разом.
