Переваги та недоліки багатофотонної лазерної скануючої мікроскопії (MLSM)
Багатофотонна лазерна скануюча мікроскопія — це експериментальний метод, заснований на технології лазерної скануючої мікроскопії, яка забезпечує кращі можливості оптичного розділення для тривимірного спостереження. Метод багатофотонного збудження флуоресценції використовує довгохвильове червоне світло або ближнє інфрачервоне світло для отримання флуоресцентних зображень зразків високої роздільної здатності, що завдає мінімальної шкоди живим зразкам. Тому він підходить для візуалізації живих клітин, особливо товстих живих тканин, таких як зрізи мозку, ембріони тощо. Дослідження візуалізації цілих органів або навіть цілих тіл.
Переваги наступні:
1. Використовуйте червоне світло або інфрачервоне світло для збудження, а розсіювання світла невелике (розсіювання дрібних частинок обернено пропорційно четвертій степені довжини хвилі).
2. Точка не потрібна, і можна зібрати більше розсіяних фотонів із поперечного перерізу зображення.
3. Обскура не може розрізнити розсіяні фотони, що випромінюються з розфокусованої області або зони фокусування, і співвідношення сигнал/шум багатофотонного зображення в глибоких шарах є хорошим.
4. Ультрафіолетове або видиме світло, яке використовується для однофотонного збудження, легко поглинається та ослаблюється зразком до того, як промінь досягне фокальної площини, і важко збудити глибокі шари.
5. З точки зору спостереження під біологічним мікроскопом, перше, щоб не пошкодити активний стан самого організму та підтримувати потік води, концентрацію іонів, кисню та поживних речовин. У разі спостереження за світлом і тепло, і енергія фотонів повинні залишатися в межах кількості випромінювання та енергії світла, щоб клітини не пошкодилися.
6. Багатофотонна мікроскопія також має багато переваг. Наприклад, з точки зору тривимірної роздільної здатності, проникнення в глибину, ефективності розсіювання, фонового освітлення, співвідношення сигнал/шум, керування тощо існують трансцендентні характеристики, яких попередні лазерні мікроскопи не мали або не могли зрівняти.
Багатофотонна конфокальна лазерна скануюча мікроскопія була поширена на різні галузі досліджень і застосування. Він може проводити тривимірне неруйнівне спостереження зразків у їхньому природному стані та може покращити роздільну здатність і співвідношення сигнал/шум системи. Використання матеріалів багатофотонного збудження Зміни у властивостях також можуть реалізовувати тривимірне зберігання даних висоти та тривимірну мікрообробку в будь-якому напрямку, що має високу прикладну цінність. Вважається, що з подальшим розвитком обладнання, матеріалів, лазерних технологій тощо, пов’язаних із багатофотонною конфокальною мікроскопією, фотонна конфокальна лазерна скануюча мікроскопія отримає більший розвиток і ширше застосування.
Недоліки такі:
1. Він може відображати лише флуоресценцію.
2. Якщо зразок містить хромофори, які можуть поглинати світло збудження, наприклад пігменти, зразок може бути пошкоджений теплом.
3. Роздільна здатність трохи зменшена. Хоча це можна покращити, використовуючи одночасно конфокальні отвори, буде втрата сигналу.
4. Обмежена дорогими надшвидкими лазерами, вартість багатофотонних скануючих мікроскопів відносно висока.
