Налагодження системи формування оптичного шляху світлового мікроскопа та контуру мікроскопічного дослідження
Налаштування системи оптичного шляху візуалізації та схема мікроскопічного дослідження
Налаштування оптичної системи зображення мікроскопа здійснюється відповідно до потреб різних технік мікроскопії. Так звана мікроскопія, у двох словах, — це метод освітлення, який використовується під час спостереження зразка через мікроскоп, а також техніка та метод отримання кращого контрасту зображення, сформованого зразком. Нижче наведено короткий опис розвитку мікроскопії в кількох методах і відповідного методу налаштування оптичної системи візуалізації мікроскопа.
1. Світле поле передачі:
Це найбільш традиційний і поширений метод застосування з моменту винаходу мікроскопа. Основні компоненти: a. Об’єктив: будь-який об’єктив можна використовувати для спостереження у світлому полі; b. Підзорна труба: можна використовувати будь-які види підзорної труби, бажано з апертурною діафрагмою. Метод налаштування: після налаштування системи освітлення Kuhler мікроскопа вище можна застосувати метод світлого поля. Сфера застосування: усі пофарбовані зрізи тканин, мазки крові тощо. Запобіжні заходи: a. При використанні світлопольного методу спостереження необхідно налаштувати систему освітлення Кюлера; b. Діафрагма поля зору не повинна відкриватися довільно, а передня лінза конденсорного дзеркала повинна бути розташована фактично назовні та всередину оптичного шляху відповідно при використанні лінз об’єктива 10×, менше 10× і більше 10 ×; в. Апертурну діафрагму конденсорного дзеркала не слід використовувати для регулювання яскравості поля зору, а висоту конденсорного дзеркала не слід регулювати без розбору, інакше роздільна здатність мікроскопа буде знижена, а роздільна здатність пофарбованої тканини буде знижена. буде пошкоджено. роздільна здатність мікроскопа та пошкодження налаштовано на систему освітлення Кюлера; d. для мікрофотографій, при кожній зміні використання збільшення лінзи об’єктива, ви повинні налаштувати діафрагму апертури збиральної лінзи таким чином, щоб її розмір точно дорівнював числовій апертурі, що використовується в лінзі об’єктива 2/3.
2. Метод фазового контрасту в прохідному світлі:
Це сучасний метод дослідження під мікроскопом з контрастним методом. Основні складові: фазово-контрастний об’єктив, світлова та фазово-контрастна оптична труба багатоцільова, телескоп-фокусувальник, світлофільтри.
Методи коригування:
a. На основі налаштування системи освітлення Кюлера чітко сфокусуйте зразок за допомогою методу світлого поля
b. Поверніть підзорну трубу на Ph1, щоб вирівняти положення шкали циферблата, виберіть об’єктив з фазовим контрастом 10 × і замініть прозорий зразок, який потрібно спостерігати.
в. Від'єднайте один із окулярів, замініть його центрованим телескопом і сфокусуйтеся на двох фазових контрастних кільцях у полі зору (чорному фазовому контрастному кільці лінзи об'єктива та світлопропускному фазовому контрастному кільці збиральної лінзи).
d. Два кільця фазового контрасту в полі зору можуть не обов’язково збігатися, відрегулюйте два регулювальні пристрої на підзорній трубі (регулюйте ліве та праве положення важеля регулювання кільця фазового контрасту та відрегулюйте переднє та заднє положення фрикційної ручки) , щоб кільце пропускання світла для передньої та задньої сторони праворуч і ліворуч збігалося з чорним кільцем
д. Після налаштування поверніться до окуляра для спостереження та натисніть зелений фільтр на оптичний шлях, щоб побачити фазово-контрастне зображення зразка.
f. Якщо для спостереження є об’єктиви 20× і 40×, точкова лінза повинна бути встановлена в положення Ph2, а при використанні 100 об’єктивів, точкова лінза повинна бути встановлена в положення Ph3.
Сфера застосування: він підходить для спостереження за прозорими, незабарвленими або незабарвленими зразками, такими як усі види клітин, живі тканини, незабарвлені або незабарвлені зрізи тканин, водні організми тощо.
3. Метод диференціальної інтерференції фазового контрасту:
Щоб подолати фазовий контраст, метод спостереження за деталями зразка навколо зображення, що супроводжується ореолом, маскує деталі, які слід було побачити, а також зразки або зрізи тканини вимагають досить тонкої товщини, в принципі, можна бути товщим ніж 10 мкм та інші обмеження, використання принципу двопроменевої інтерференції для розробки субдиференційного методу фазового контрасту інтерференції.
Методи коригування:
a. Метод ДВЗ повинен бути налаштований на основі того, що система Кулеміна вже була налаштована
b. Використовуючи об’єктив 10×, визначте положення фокусування об’єктива, яке дозволяє чітко бачити зразок із яскравим полем зору.
в. Помістіть поляризатор на шлях освітлення, звернувши увагу на те, щоб він був орієнтований у напрямку схід-захід.
d. Поверніть диск конденсора в положення, яке відповідає використанню лінзи об’єктива 10 ×, тобто DIC 0.3-0.4.
д. Вставте повзунок DIC для об’єктива 10× на задній частині об’єктива або на конвертері об’єктива.
f. Вставте аналізатор в оптичний шлях зображення та зверніть увагу, що його орієнтація повинна бути південь-північ.
g. Замініть прозорий зразок для спостереження, увімкніть джерело світла, щоб чітко сфокусувати зразок.
ч. Відрегулюйте вставку DIC так, щоб диференціальне інтерференційне контрастне зображення досягало найкращого ефекту, тобто найбільш очевидного рельєфного ефекту.
i. Одночасно відрегулюйте апертурну діафрагму конденсорного дзеркала, щоб ефект контрасту також був оптимальним.
j. Потім налаштуйте деталі вибірки, щоб побачити структуру вибірки на різних рівнях.
k. Якщо вставити додатковий колір (червону сповільнювальну пластину першого порядку) і одночасно відрегулювати вставку DIC, у полі зору можна буде побачити яскраві кольори, що постійно змінюються: червоний, оранжевий, жовтий, зелений, синій, бузковий, рожевий, рожево-фіолетовий і золотисто-жовтий. Сфера застосування: прозорі або незабарвлені зрізи тканин, товщиною приблизно до 100 мкм, живі тканини та живі клітини в культурі, малі живі організми тощо.
